实验四酶联免疫吸附试验ELISA.pptxVIP

实验四酶联免疫吸附试验(ELISA)汇报人：文小库2024-01-11

Contents目录实验简介实验材料与试剂实验步骤结果分析实验注意事项实验总结与展望

实验简介01

酶联免疫吸附试验(ELISA)是一种常用的免疫分析技术，通过酶标记的抗体或抗原与固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合，再加入酶的底物，根据产生的有色产物来检测抗原或抗体的存在。酶联免疫吸附试验(ELISA)的定义

酶联免疫吸附试验基于抗原抗体反应的原理，将酶标记在抗体或抗原上，通过与固相载体上的抗原或抗体结合，形成酶-抗原-抗体复合物。加入底物后，酶催化底物生成有色产物，通过比色法测定有色产物的量，间接反映待测抗原或抗体的浓度。ELISA的原理

ELISA的应用领域生物科学研究用于检测和研究生物体内的各种蛋白质、激素、细胞因子等生物分子，如生长因子、细胞因子、肿瘤标志物等。医学诊断用于检测人体内的病原微生物、自身抗体、肿瘤标志物等，辅助临床诊断和监测疾病进程。食品安全检测用于检测食品中的农药残留、兽药残留、毒素等有害物质，保障食品安全。环境监测用于检测环境中的有害物质，如重金属、有机污染物等，评估环境污染程度和生态健康状况。

实验材料与试剂02

酶标板酶标抗体抗原洗涤液实验材于吸附抗原或抗体，支持酶促反应进行。与待测抗原特异性结合的抗体，标记有酶。待检测的目标物质。用于清洗酶标板，去除未结合的物质。

实验试剂与设备在酶促反应中提供反应底物，使酶催化生成有色产物。终止酶促反应，使颜色不再变化。用于检测酶促反应产生的有色产物，定量测定抗原或抗体浓度。用于精确加样，确保实验结果的准确性。酶底物终止液酶标仪移液器

实验步骤03

包被抗体或抗原将特异性抗体或抗原与酶标板孔结合，使酶标板孔的表面形成抗体的分子层。包被过程通常使用的是间接ELISA，即酶标记的抗体与抗原结合。封闭为了防止未结合的抗体与抗原在随后的步骤中与酶标记的二抗结合，导致非特异性反应，需要进行封闭。封闭液通常为一定浓度的无关蛋白质溶液，如牛血清白蛋白或脱脂奶粉溶液。酶标板孔的包被与封闭

将待检测的样本加入酶标板孔中，与包被的抗体或抗原进行反应。加样在一定温度下保持一段时间，使抗原抗体充分结合。孵育时间与温度需要根据具体的实验条件来确定。孵育加样与孵育

洗去未结合的物质，减少非特异性结合和背景干扰。洗板机的使用可以大大提高实验效率和准确性。将酶标记的二抗加入酶标板孔中，与特异性抗体或抗原结合。酶标抗体通常为过氧化物酶或碱性磷酸酶，它们能催化底物显色。洗板与加酶标抗体加酶标抗体洗板

洗板再次洗去未结合的酶标抗体，减少背景干扰。显色加入底物溶液，在酶的催化下底物发生化学反应，产生颜色。颜色的深浅与待检测样本中的抗原或抗体浓度呈正相关。洗板与显色

加入终止液，停止显色反应。在碱性磷酸酶标记系统中，常用硫酸作为终止液。终止反应使用酶标仪在450nm波长处读取各孔的光密度值，通过标准曲线计算待测样本中抗原或抗体的浓度。读数终止反应与读数

结果分析04

根据酶标仪测得的光密度值，与临界值比较，超过临界值判定为阳性。阳性判断酶标仪测得的光密度值小于临界值，判定为阴性。阴性判断根据阳性对照孔的平均值加上3倍的标准差。临界值确定结果判读

结果分析方法定量分析通过标准品浓度与光密度值的线性回归曲线，计算出待测样本的浓度。半定量分析通过标准品浓度与光密度值的比较，将待测样本分为阴性、弱阳性、阳性、强阳性等几个等级。

操作误差由于操作过程中的人为误差，如加样、洗涤等步骤，可能导致结果偏离。仪器误差酶标仪的准确性和稳定性对结果有很大影响，需要定期校准和维护。试剂误差试剂的质量和保存条件对实验结果有直接影响，需要确保试剂质量可靠和保存得当。结果误差分析030201

实验注意事项05

确保所有试剂都已正确准备，并按照实验要求进行储存。检查试剂的有效期和标签，确保无误。试剂准备对实验所需的所有设备进行检查，确保其正常工作。这包括但不限于酶标仪、洗板机、移液器等。设备检查确保实验室环境整洁、无尘，并符合实验要求。调整实验室温度和湿度，确保实验过程中环境条件稳定。实验环境在进行实验前，确保穿戴适当的个人防护装备，如实验服、化学防护眼镜、化学防护手套等。个人防护实验前的准备

遵循实验操作规程，确保每一步操作准确无误。如有疑问，应立即停止操作并寻求指导。操作规范在温育和洗板过程中，应严格控制时间和温度。洗板时应保证每孔冲洗充分，避免残留。温育与洗板确保样本处理得当，避免样本污染或交叉污染。对样本进行标记，并记录相关信息。样本处理使用移液器进行加样时，应确保加样量准确，避免产生气泡或加样不均。加样后轻轻混匀，避免产生泡沫。加样操作实验操作注意事项

了解实验过程中使用的化学品性质，避免直接接触和吸入。如有必要，应在专业人员的