DB41T 1733-2018 玉米中驸马毒素B1测定 荧光偏振免疫分析法.docxVIP

ICS65.020.20B20

DB41

河南省地方标准

DB41/T1733—2018

玉米中伏马毒素B1测定荧光偏振免疫分析法

2018-11-26发布2019-02-26实施

河南省质量技术监督局发布

DB41/T1733—2018

I

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3原理 1

4试剂 1

5仪器 2

6试样制备 2

7分析步骤 2

7.1提取 2

7.2测定 2

8计算 3

9精密度 3

9.1重复性 3

9.2再现性 3

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II

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由河南省农业厅提出并归口。

本标准起草单位：河南省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，河南省农产品质量安全检测中心，延津县农产品质量安全检测站。

本标准主要起草人：刘冬梅、刘继红、王红旗、余新华、李淑芳、尹海燕、马莹、张军锋、张迪、曹成、徐晋豫。

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1

玉米中伏马毒素B1的测定荧光偏振免疫分析法

1范围

本标准规定了玉米伏马毒素B1的测定荧光偏振免疫分析法。本标准适用于玉米中伏马毒素B1的测定。

本标准的检测限为474.3μg/kg。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

3原理

试样中用磷酸盐缓冲溶液提取的伏马毒素B1与伏马毒素抗体形成复合物。在溶液中加入伏马毒素B1荧光标记物，与伏马毒素B1竞争伏马毒素抗体，形成伏马毒素B1荧光标记物与伏马毒素抗体的复合物产生荧光偏振。通过测定荧光偏振强度计算伏马毒素B1含量。

4试剂

试剂中的用水应符合GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。

4.1伏马毒素B1荧光标记物（6，-（4,6-二氯三嗪基）氨基荧光素标记的伏马毒素B1，6-DTAF）（伏马毒素B1荧光标记物的配置详见附录A）。

4.2伏马毒素抗体（P2A5-3-F3）。

4.3γ-牛血清球蛋白(γ-BGG），99%，CAS号9007-83-4。

4.4甲醇(色谱纯)。

4.5乙腈(色谱纯)。

4.6伏马毒素B1标准品：晶体，纯度95%；或经过国家认证授予标准物质证书的标准物质。

4.710mM磷酸盐缓冲溶液（PBS缓冲溶液）：其中含有10mM磷酸钠，0.15M氯化钠，pH=7.2。

4.80.1%γ-BGG溶液：称取0.05gγ-BGG（4.3）溶解于50mL10mMPBS缓冲溶液中（4.7）。

4.9伏马毒素B1荧光标记物储备液（100μg/mL）：取1mg伏马毒素B1荧光标记物（4.1），用甲醇（4.4）溶解，定容到10mL，储存与棕色瓶中，4℃保存。

4.10伏马毒素荧光标记物使用液（0.4μg/mL）：取8μL伏马毒素B1荧光标记物储备液（4.9），加入到1992μLPBS缓冲溶液（4.7），储存于棕色瓶中。现配现用。

4.11抗体溶液（4.0μg/mL）：抗体用0.1%γ-BGG溶液（4.8）稀释到浓度为4.0μg/mL。

4.121000mg/L伏马毒素B1标准贮备液：称取10mg伏马毒素B1，用甲醇溶解，定容到10mL容量瓶中。-20℃冰箱中保存。

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2

4.1350mg/L伏马毒素B1标准使用液：取75μL标准贮备液（4.12），加入到1425μLPBS缓冲溶液中，混匀。溶液浓度为50mg/L。现配现用。

4.14伏马毒素B1标准工作液：分别准确吸取伏马毒素B1标准使用液（4.13）0.002mL、0.004mL、0.02mL、0.04mL、0.10mL、0.20mL、0.40mL、1.00mL、4.00mL于10mL的容量瓶中，用