【大学课件】常用分子生物学技术的原理及应用.pptVIP

常用分子生物学技术的原理及应用本课程将介绍分子生物学领域常用的技术，包括它们的原理、应用场景和实际操作方法。

分子生物学技术的发展历程1早期阶段20世纪50年代，DNA双螺旋结构的发现奠定了分子生物学的基础2重组DNA技术20世纪70年代，重组DNA技术的出现，开启了基因工程时代3PCR技术20世纪80年代，PCR技术的应用，使基因检测和分析变得更加快速便捷4基因组学时代21世纪初，人类基因组计划的完成，标志着基因组学时代的到来5新技术涌现近年来，高通量测序、基因编辑等新技术不断涌现，推动着分子生物学技术的发展

DNA提取及纯化的基本原理细胞裂解利用物理或化学方法破坏细胞膜，释放出DNA。蛋白质去除通过蛋白酶消化或盐析等方法去除细胞中的蛋白质。DNA沉淀利用乙醇或异丙醇等有机溶剂使DNA沉淀，分离DNA和其他杂质。DNA洗涤用缓冲液洗涤DNA沉淀，去除残留的杂质。

常见DNA提取方法及应用酚氯仿法经典方法，利用酚氯仿将蛋白质和多糖等杂质从DNA中分离。柱式法使用硅胶膜吸附DNA，去除杂质，方便快捷，广泛应用于基因检测。试剂盒法操作简便，一步法提取DNA，适合实验室大规模提取样本。

酶切反应的基本原理及应用识别特定序列限制性内切酶识别DNA中的特定的核苷酸序列，并切割DNA双链。产生粘性末端大多数限制性内切酶切割DNA后会产生粘性末端，可用于DNA连接。构建基因载体通过限制性内切酶切割DNA，可以构建基因载体，用于克隆特定基因。

琼脂糖凝胶电泳的基本原理及应用1分离原理根据DNA片段的大小进行分离2电泳过程带负电荷的DNA片段在电场中向正极移动3应用范围DNA片段大小的分析、PCR产物的检测、基因克隆

聚合酶链式反应的基本原理及应用原理PCR利用DNA聚合酶在体外模拟DNA复制过程，以特定DNA片段为模板，在引物的引导下，进行反复的DNA合成，从而使目标DNA片段得到扩增。应用PCR广泛应用于基因克隆、基因诊断、亲子鉴定、法医鉴定、古生物研究等领域。

qPCR和RT-qPCR技术的原理及应用qPCR原理利用荧光染料或荧光探针检测PCR反应过程中扩增产物的积累量，实时监测PCR反应进程，从而定量分析模板的初始拷贝数。RT-qPCR原理先将RNA反转录为cDNA，然后进行qPCR反应，用于定量分析RNA的表达水平。

克隆技术的基本原理及应用复制DNA片段克隆技术利用酶切、连接等技术将目标基因插入载体，形成重组DNA分子，然后将重组DNA分子导入宿主细胞进行复制。创造遗传相同个体克隆技术可以用于复制动物，创建具有相同遗传信息的个体，用于研究和农业生产。治疗疾病克隆技术可以用于生成干细胞，用于治疗疾病，例如帕金森病、糖尿病等。

测序技术的发展历程及原理第一代测序Sanger测序法，也被称为双脱氧核苷酸链终止法，是第一代测序技术的代表。它利用ddNTP终止DNA合成反应，根据片段长度确定碱基序列。第一代测序技术以其准确性和较高的通量，在基因组测序和基因分析等领域发挥了重要作用。第二代测序第二代测序技术，以Illumina公司的Solexa测序技术为代表。它以边合成边测序为原理，将DNA片段固定在芯片上，通过荧光标记的ddNTP识别碱基，并通过图像采集和分析得到序列信息。第二代测序技术通量更高，成本更低，使大规模基因组测序成为可能。第三代测序第三代测序技术以单分子测序为主要特征，代表技术包括OxfordNanopore和PacBio测序技术。它们通过检测单个DNA分子通过纳米孔或酶的电信号变化，直接读取DNA序列。第三代测序技术可以读取更长的序列，并可用于检测基因组结构变异和表观遗传修饰等。

基因文库的构建及应用基因克隆将目标基因插入载体，形成重组DNA分子，并将其导入宿主细胞。文库筛选通过特定方法筛选含有目标基因的克隆，如抗生素抗性筛选、酶活性筛选等。基因表达利用基因文库进行基因表达分析，研究基因的功能和调控机制。

DNA指纹分析技术的原理及应用1个体识别DNA指纹技术基于个体之间DNA序列的差异，可以用于犯罪现场的个体识别，亲子鉴定等。2群体遗传学DNA指纹技术可以用于研究种群的遗传多样性、基因流动、亲缘关系等。3医学诊断DNA指纹技术可以用于遗传病的诊断和遗传咨询。

DNA微阵列技术的原理及应用高通量分析DNA微阵列技术可以在单个芯片上同时分析成千上万个基因，大幅提高了研究效率。基因表达谱分析通过比较不同样本的基因表达水平，可以揭示基因在疾病发生发展中的作用。药物研发DNA微阵列技术可以用于筛选新的药物靶点，并评估药物的疗效。

RNA干扰技术的原理及应用原理RNA干扰(RNAi)是一种生物体内天然存在的基因沉默机制，通过双链RNA(dsRNA)抑制特定基因的表达。