DB22T 1673-2012 莱姆病螺旋体的检测 荧光PCR法　　.pdfVIP

ICS11.020

C62

备案号：35806-2013DB22

吉林省地方标准

DB22/T1673—2012

莱姆病螺旋体的检测荧光PCR法

DetectionofBorreliaburgdorfe——FluorescencePCR

2012–12–17发布2013–01–01实施

吉林省质量技术监督局发布

DB22/T1673—2012

前言

本标准依据GB/T1.1-2009、GB/T20001.4-2001给出的规则起草。

本标准由吉林出入境检验检疫局提出并归口。

本标准起草单位：吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心。

本标准主要起草人：刘阳、王玮琳、丁旭、孙舒、刘韬、刘金华、牛茜、罗雁非、郑旭。

I

DB22/T1673—2012

莱姆病螺旋体的检测荧光PCR法

警告——为了保护实验室人员的安全，应由具备资格的工作人员进行检测。培养物和废物应小心处

置，并按GB/T19489中的有关规定执行。

1范围

本标准规定了莱姆病螺旋体荧光PCR检测方法

本标准适用于莱姆病螺旋体的实验室检测。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的

版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法

GB/T19489实验室生物安全通用要求

3缩略语

下列缩略语适用于本文件。

PCR:聚合酶链反应（Polymerasechainreaction）

DNA:脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleicacid）

Taq酶:DNA聚合酶

FAM:6-羧基-荧光素（一种荧光报告基团）（6-carboxy-fluorescein）

MGB:小沟结合物（一种荧光淬灭基团）(Minorgroovebinder)

SDS:十二烷基硫酸钠(Sodiumdodecylsulfate)

CTAB:十六烷基三乙基溴化铵（Hexadecyltrimethylammoniumbromide）

TE:缓冲液(Tris-ClEDTA)

Tm值:核酸融解温度（Meltingtempreture）

Ct值:每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值时所经历的循环数(Cyclethreshold)

4原理

实时荧光PCR方法，是在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累，实时监测整个PCR进程，

最后通过荧光信号的增幅情况来判定反应结果。PCR反应体系中加入一对引物的同时加入一条特异性荧

光探针，探针两端分别标记荧光报告基团和荧光淬灭基团，PCR扩增时，利用Taq酶的水解作用，使探针

上的荧光报告基团远离淬灭基团而发出荧光信号，荧光检测系统可接收到荧光信号，此方法检测的是积

累荧光。MGB探针（Minorgroovebinderoligodeoxynucleotideconjugate,MGB-ODN)，5′端标记FAM

荧光素为报告基团，3′端采用了非荧光性的淬灭基团，吸收报告基团的能量后并不发光，降低了本底

信号的干扰。此外，MGB探针的3′端还连接了一个二氢环化吲哚卟啉-三肽(Dehydrocyclopyrroindole

tripetide,D