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异质型乙酰辅酶A羧化酶及其生产3-羟基丙酸的研究进展

张鑫，丁钟灵，王肖娜，程智怡，李幸雨，夏立志，徐晓玲，沈洁洁

杭州师范大学基础医学院，浙江杭州311121

摘要

乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)催化底物乙酰辅酶A的羧化，是脂肪酸从头合成的起始限速酶.近年来，在一些嗜热古细菌、丝状不产氧光合细菌等中发现的ACCase还参与一种新型固定二氧化碳的3-羟基丙酸循环代谢途径.ACCase与丙二酰辅酶A还原酶直接催化该循环的起始两步反应，合成代谢特征中间物3-羟基丙酸(3-HP).本文围绕参与脂肪酸从头合成和3-羟基丙酸循环的异质型ACCase，系统介绍和总结异质型ACCase组成差异、催化过程、亚基构象变化和表达调控特点，扩展对ACCase结构与功能多样性和分子进化的理解.同时描述了利用异质型ACCase工程改造合成3-HP，为绿色、高效生物合成3-HP提供理论依据和重要策略.

关键词

异质型乙酰辅酶A羧化酶；3-羟基丙酸；亚基结构；催化机制；调控作用

引言

1957年，Wakil等从鸽子肝脏提取液中分馏纯化获得R1—R44种组分，其中R1在1958年被证明含有大量生物素，并参与了以乙酰辅酶A(Ac-CoA)为底物的长链脂肪酸合成.由此乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)被首次分离出来，并被证实参与生物体内脂肪酸的合成.随后越来越多的研究发现ACCase广泛分布于细菌、植物和动物等绝大多数生物中，以生物素为辅因子，催化Ac-CoA羧化转变为丙二酰辅酶A(M-CoA)，是脂肪酸从头合成的起始限速酶.反应底物Ac-CoA和产物M-CoA都是脂肪酸合成的原料，并且M-CoA所携带的丙二酰基团作为二碳单元，直接参与脂酰链的延伸过程.

ACCase在结构和来源上可分为同质型和异质型.同质型ACCase主要存在于真核生物中，在多肽链中依次形成3个功能结构域：生物素羧化酶(BC)、生物素羧基载体蛋白(BCCP)和羧基转移酶(CT).同质型蛋白复合体以同型二聚体形式发挥活性，整体结构稳定、保守、不易解离.异质型ACCase主要存在于原核生物中，是由不同基因编码的多个亚基所组成的多酶复合酶.ACCase因其在脂肪酸合成中的关键作用及其在原核、真核生物中的结构差异而受到人们的广泛关注，在新型抗生素筛选、合成和油脂生产中均开展了大量研究.

近年来，在一些嗜热古细菌、丝状不产氧光合细菌(FAPs)等中发现的异质型ACCase还参与一种新型固定二氧化碳的3-羟基丙酸循环.该循环的起始两步反应是异质型ACCase催化Ac-CoA羧化生成M-CoA，随后被丙二酰辅酶A还原酶(MCR)还原而生成标志性中间代谢产物3-羟基丙酸(3-HP).3-HP是一种重要的平台化合物，能进一步转化为丙烯酸、丙烯腈和1,3-丙二醇等有价值的化学物质.值得关注的是，3-HP的化学合成普遍存在能耗高、毒性大、副产品多等缺陷，利用代谢工程途径生产3-HP的生物法逐渐成为热点研究方向.以葡萄糖为碳源合成3-HP的途径中，基于起始两步反应合成3-HP的生物法是力学上较有利的短合成途径.

本文回顾并总结近年来参与脂肪酸从头合成和3-羟基丙酸循环异质型ACCase的组成、亚基结构、催化及其表达调控特点，以扩展对ACCase结构与功能多样性、分子进化的理解.此外，本文介绍了以3-羟基丙酸循环的起始两步反应为基础，通过基因工程方法，由异质型ACCase合成3-HP的范例，以期为绿色、高效开发3-HP提供理论依据和策略.

1异质型ACCase组成的多样性

1.1异质型ACCase亚基数目的多样性

异质型ACCase在不同微生物中的亚基编码基因不同.例如，结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)中ACCase包含α亚基和β亚基，其中α亚基是由BC和BCCP组成的双结构域蛋白，其编码基因有3个，分别是accA1—A3.β亚基行使CT蛋白的功能，其编码基因有6个，分别是accD1—D6.这6个亚基为细胞膜脂质的合成提供不同酰基，如丙酰、乙酰或丁醛基团.这些产物为脂肪酸合成途径提供底物，催化产生细胞壁中的分枝菌酸和细胞包膜中的多甲基分支脂肪酸.天蓝色链霉菌(Streptomycescoelicolor)中编码ACCase亚基的基因种类丰富，转录翻译得到的产物发挥活性功能，为聚酮合成途径提供代谢产物.本实验室研究的光合绿丝菌(Chloroflexusaurantiacu)和光合玫瑰菌(Roseiflexuscastenholzii)是FAPs的两个典型菌株，这两个菌株基因组上编码ACCase亚基的基因众多，转录翻译后的蛋白质催化3-羟基丙酸循环的起始反应.

不同原核生物中异质型ACCase的亚基组成具有多样性.按照亚基组成主要分为以下3类：第一类以大肠杆菌(Esch