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直接测定法 计数法:直接计数法和间接计数法 称重量法; 菌体内重要组成测定法: 含N量法:N×6.25=Pr DNA/RNA法 叶绿素法 四、 微生物生长量的测定方法 本文档共120页;当前第63页;编辑于星期三\9点12分 直接计数这类方法是利用特定的细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。此法的缺点不能区分死菌与活菌。每毫升原液所含细菌数=每小格平均细菌数×400×l000×稀释倍数 计数法 本文档共120页;当前第64页;编辑于星期三\9点12分 本文档共120页;当前第65页;编辑于星期三\9点12分 计数室 本文档共120页;当前第66页;编辑于星期三\9点12分 各种型号的全自动血球计数仪 本文档共120页;当前第67页;编辑于星期三\9点12分 间接计数此法又称活菌计数法,其原理是每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下可以通过生长形成菌落。每毫升原菌液活菌数=同一稀释度三个以上重复平皿菌落平均数×稀释倍数 本文档共120页;当前第68页;编辑于星期三\9点12分 本文档共120页;当前第69页;编辑于星期三\9点12分 本文档共120页;当前第70页;编辑于星期三\9点12分 此法的原理是根据每个细胞有一定的重量而设计的。它可以用于单细胞、多细胞以及丝状体微生物生长的测定。 微生物湿重 微生物干重 蛋白质总量 DNA含量 重 量 法 本文档共120页;当前第71页;编辑于星期三\9点12分 蛋白质总量 蛋白质总量=含氮量×6.25 细胞总量=蛋白质总量÷(50%~80%(或65%))≈蛋白质总量×1.54 DNA含量 核酸DNA是微生物的重要遗传物质,每个细菌的DNA含量相当恒定,平均为8.4×10-5ng。 本文档共120页;当前第72页;编辑于星期三\9点12分 间接测定法 比浊法 生理指标法 本文档共120页;当前第73页;编辑于星期三\9点12分 生理指标法 生理指标包括微生物的呼吸强度、耗氧量、酶活性、生物热等。 这是根据微生物在生长过程中伴随出现的这些指标,样品中微生物数量多或生长旺盛,这些指标愈明显,因此可以借助特定的仪器如瓦勃氏呼吸仪、微量量热计等设备来测定相应的指标。 本文档共120页;当前第74页;编辑于星期三\9点12分 第二节 微生物的生长因子 一、温度 二、pH 三、氧化还原电位 四、溶解氧 五、太阳辐射 六、水的活度与渗透压 七、表面张力 本文档共120页;当前第75页;编辑于星期三\9点12分 一、温度 细菌 最低温度oC 最适温度oC 最高温度oC 嗜冷菌 -5~0 5~10 20~30 嗜中温菌 5~10 25~40 45~50 嗜热菌 30 50~60 70~80 嗜超热菌 55oC以上 70~105 110~113 根据一般微生物对温度的最适生长需求, 将微生物分为四大类: 本文档共120页;当前第76页;编辑于星期三\9点12分 嗜冷微生物(低温微生物)的嗜冷机理 酶系在低温下仍能起催化作用; 细胞膜含较多的不饱合脂肪酸在低温下仍具有通透性。 生长速度 温度 停止生长 致死 最低 最高 最适 低温对普通微生物的影响: 代谢降低; 生长繁殖停滞 ; 仍然存活 ; 常在低温下对菌种和食品保藏 本文档共120页;当前第77页;编辑于星期三\9点12分 嗜热微生物的嗜热机制: 细胞内的酶具强抗热性; 产生的多胺,热亚胺和高温精胺物质对蛋白质等组织结构具有保护作用; 核酸也具有热稳定性的保护结构; 细胞膜含有较多的饱和脂肪酸和直链脂肪酸,使膜具有稳定性。 本文档共120页;当前第78页;编辑于星期三\9点12分 二、pH 微生物 最低pH 最适pH 最高pH 细菌 3~5 6.5~7.5 8~10 酵母菌 2~3 4.5~5.5 7~8 霉菌 1~3 4.5~5.5 7~8 微生物的生命活动、物质代谢与pH密切相关。不同的微生物要求不同pH,见下表: 本文档共120页;当前第79页;编辑于星期三\9点12分 pH对微生物的影响 影响细胞膜透性与稳定性 ; 影响物质溶解度; 影响细胞表面电荷分布; 因此影响微生物生长、繁殖、发育; 各类微生物能够生长的pH值较宽,但细胞内部pH值却接近中性; 微生物的活动也能改变环境中的pH值。 本文档共120页;当前第80页;编辑于星期三\9点12分 根据微生物生长的最适pH,可以将微生物分为: 嗜酸性微生物 嗜碱性微生物 耐酸及耐碱微生物 本文档共120页;当前第81页;编辑于星期三\9点12分 三、氧化还原电位(Eh) 在自然环境中,氧
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