DB22T 2052-2014 饲料中沙门氏菌测定 实时荧光PCR 方法.pdfVIP

ICS07.100.30

B20

备案号：41840-2014DB22

吉林省地方标准

DB22/T2052—2014

饲料中沙门氏菌测定实时荧光PCR方法

DeterminationofsalmonellainfeedstuffsReal-timePCRmethod

2014-02-28发布2014-04-30实施

吉林省质量技术监督局发布

DB22/T2052—2014

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。

本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。

本标准主要起草单位：吉林省产品质量监督检验院、国家农业深加工产品质量监督检验中心、中华

人民共和国吉林出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：史艳宇、刘金华、王伟、刘晓晖、赵立群、侯宇、柴竹林、张涛。

T

DB22/T2052—2014

饲料中沙门氏菌测定实时荧光PCR方法

1范围

本标准规定了饲料中沙门氏菌的实时荧光PCR检验方法。

本标准适用于饲料中沙门氏菌的快速筛选检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T13091饲料中沙门氏菌的检验方法

GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

实时荧光PCRreal-timefluorescentPCR

实时荧光聚合酶链式反应。

3.2

Ct值cyclethresholdvalue

每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。

4原理

对样品的增菌培养物进行DNA提取，通过实时荧光PCR扩增，观察实时荧光PCR的增幅曲线，从而

对饲料中的沙门氏菌进行快速检测。

5试剂和培养基

除特别说明以外，所有试剂均为分析纯，水为按照GB/T6682规定的一级水。所有试剂均用无DNA

酶污染的容器分装。

5.1引物及探针：

a)上游引物：5’-GTGAAATAATCGCCACGTCGGGCAA-3’

b)下游引物：5’-TCATCGCACCGTCAAAGGAACC-3’

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DB22/T2052—2014

c)探针：5-FAM-TTATTGGCGATAGCCTGGCGGTGGGTTTTGTTG-TAMRA-3’

5.2TaqDNA聚合酶。

5.3dNTP:dATP(deoxyadenosinetriphosphate,脱氧腺苷三磷酸)、dGTP(deoxycytidine

triphosphate,脱氧鸟苷三磷酸)、dCTP(deoxycytidinetriphosphate,脱氧胞苷三磷酸)、dTTP

(deoxythymidinetriphosphate,脱氧胸苷三磷酸)。

5.4细菌基因组DNA提取纯化试剂盒。

5.510×PCR缓冲液：含200mmol/LTris-HCl(pH8.4),200mmol/L氯化钾(KC1),15