哺乳动物克隆技术课件.pptVIP

將數枚重構胚放入100μL的胚胎培養液（CR1-aa）中培養48h後，選擇4細胞以上的胚胎移入鋪滿飼養層細胞的培養液滴中。在120h半換液，148h加入1mg/mL的葡萄糖。以後每隔48h半換液。5、重構胚胎的體外培養小鼠胎兒成纖維細胞6、胚胎移植方法假孕的同步發情的寄母輸卵管內移植子宮角移植體細胞核卵母細胞重構胚移入同步發情的動物輸卵管或子宮內體體體細胞克隆動物研究路線圖圖圖體外培養去核胚胎移植移核7、克隆動物的檢測方法微衛星圖譜法同工酶法*同種體細胞克隆證明了高度分化的細胞在同種去核卵母細胞的細胞質作用下可以恢復全能性，它提示卵母細胞可能具備去分化的因數，異種體細胞克隆則是探討高度分化的細胞在異種去核卵母細胞的細胞質作用下是否可以恢復全能性，它同時也可探討卵母細胞是否具有非物種差異的去分化因數。*當重組胚胎（第1代克隆胚胎）發育成多細胞胚胎時，可將此胚胎細胞分散，分散的細胞核可再與其它去核卵母細胞構成重組胚（第2代），如此可得到第3代、第4代……的克隆胚胎，这就是所谓的連續細胞核移植(serialnucleartransplantation)技術。*Cumulusoocytecomplexes,COCs；HCG：人絨毛膜促性腺激素；PMSG：孕馬血清促性腺激素；IVM：invitromaturation,體外成熟；卵丘細胞的擴展情況也常用作判斷卵母細胞成熟的特征之一。*Pieze：皮茲，MTS基本壓力單位；piezoelectric：壓電的*化學誘導去核法就是用脫羰秋水仙堿(Demecolcine)處理啟動的MII期卵母細胞使其排出第二極體。*在轉基因動物製作過程中，胚胎移植回母體常採用1～2細胞受精卵的輸卵管移植和桑椹胚的子宮移植。由於胚胎體外培養不如體內完美的原因，子宮移植在這一點上顯然不如輸卵管移植好。*美國標準細胞庫或細胞銀行（ATCC）。成熟卵母细胞比受精卵更適宜作核移植受體。*因為FinnDorset的體細胞在6年中已經進行過若干次分裂，再加上取出的乳腺細胞在體外又繼續培養了若干代，因而細胞的分裂次數與極限最高分裂次數的差比正常降生的羊要少得多。哺乳動物克隆技術隨著1997年2月Nature雜誌報導英國Roslin研究所I.Wilmut等人創造的克隆羊多莉(Dolly)誕生，生物工程掀開了新的一頁。克隆(clone)一詞原意為無性繁殖系，在體外培養的細胞中早有使用，細胞克隆是指由一個細胞經細胞分裂而產生出的一群細胞，而動物克隆是指由一個動物經無性繁殖而產生的遺傳性狀完全相同的後代個體。卵細胞供體羊ScottishBlackfacesheepDollyDollyFinnDorset(FosterMother,寄母)核供體羊克隆羊“多莉”誕生後，克隆技術研究立即成為世界各國生物學家競相開展的生物學高新技術研究。克隆技術之所以一經產生立即引起高度重視，是因為克隆技術不但具有重要的理論意義而且具有良好的應用前景。第一節哺乳動物克隆的發展歷史講授提綱第七章哺乳動物克隆技術第二節哺乳動物克隆的技術方法第三節克隆動物的早衰問題第四節克隆動物的應用前景第一節哺乳動物克隆的發展歷史同種胚胎細胞克隆同種體細胞克隆異種體細胞克隆克隆動物技術的發展已經曆了60餘年的漫長探索，根據供體細胞核與去核卵細胞的來源可歸納為3個標誌性的發展階段。1938年，[德]科學家HansSpemann最早提出克隆設想。1952年，美國科學家Briggs和King將發育後期的青蛙胚胎細胞核植入青蛙卵中，沒有發育。1965年，中國實驗胚胎學家童第周完成了金魚核移植並獲得成功。1981年，Illmensee和Hoppe用小鼠胚胎細胞第一次獲得了克隆小鼠，但其實驗未能被重複。第一個階段同種胚胎細胞克隆1984年，丹麥科學家Willadsen用胚胎細胞克隆羊獲得成功。1990年，中國科學院發育生物學研究所杜淼獲得了克隆兔。隨後，90年代，中國科學家利用胚胎細胞相繼克隆成了兔、羊、豬、牛、小鼠等幾種動物。1993年，美國的First用牛內細胞團細胞成功地獲得了克隆牛。1997年，中國學者孟勵在美國成功獲得克隆猴。至此，國內外動物克隆採用的均為胚胎細胞。1997年，孟勵首次用胚胎細胞獲得的克隆猴。1997年，英國羅斯林研究所I.Wilmut等宣佈用成年羊乳腺細胞首次獲得克隆羊。1998年，日本科學家Kato等用牛的輸卵管細胞得到克隆牛。第二個階段同種體細胞克隆1998年，美國夏威夷大學的Yanagimachi