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免疫血清学技术课件.pptVIP

免疫血清学技术课件.ppt

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標記核酸探針技術……ATGCCTTGAC…………TACGGAACTG……TACGGAACTG—放射性同位素四、補體結合反應補體結合試驗(Complementfixation):是應用蛋白質、多糖、類脂質、病毒等可溶性抗原與相應抗體結合後,其抗原抗體複合物可結合補體,但肉眼看不見,再加入致敏紅血球,即可根據是否溶血判斷抗原抗體的存在。有5個要素:抗原(待檢)抗體補體紅細胞溶血素(抗紅細胞抗體)AgAb+CAgAb+CAgAb補體結合反應的基本原理*******************免疫血清學技術概念:抗原與抗體在體內或體外均發生特異性結合反應,因為抗體主要來自血清,在體外進行的抗原抗體反應稱為血清學反應或免疫血清學技術。一、概述按抗原抗體反應性質不同分為:凝聚性反應:凝集試驗、沉澱反應標記抗體技術:螢光抗體、酶標抗體、生物素標記抗體、同位素標記抗體、其他標記抗體技術有補體參與的反應:補體結合反應、免疫粘附血凝試驗中和反應:病毒中和試驗、毒素中和試驗免疫轉印(WesternBlot)1、血清學反應的一般特點特異性與交叉性:特異性:血清學反應具有高度的特異性,如抗豬瘟病毒抗體只能與豬瘟病毒結合,不能與偽狂犬病病毒結合。交叉性:兩種抗原之間含有共同抗原的時侯,有時也發生交叉反應,如傷寒沙門氏菌與霍亂沙門氏菌常發生交叉反應。抗原抗體結合機理:以非共價鍵結合結合力(親和力):抗原決定族和抗體結合點之間形成的非共價鍵的數量、性質、距離。結合的可逆性Ab+AgAb-Ag複合物最適比與帶現象:參與反應的抗原抗體的比例反應的二階段性:第一、抗原抗體發生特異性反應,第二、抗原抗體反應的可見階段:凝集、沉澱、補體結合。影響反應的因素電解質、溫度、酸鹼度二、凝聚性試驗凝集反應:細菌紅細胞等顆粒狀抗原與相應抗血清在電解質存在下,產生可見的顆粒凝集現象。直接凝集試驗:玻片法:雞白痢玻片凝集試管法:布氏桿菌試管凝集間接凝集試驗:間接血凝試驗:豬瘟間接血凝試驗乳膠凝集試驗:豬偽狂犬病乳膠凝集試驗協同凝集試驗:SPA+AbSPA-Ab+AgSPA-Ab-Ag2.沉澱試驗:可溶性抗原(毒素、病毒、細菌裂解液)與相應抗體結合,在電解質存在情況下,產生可見的沉澱物。(1)環狀沉澱反應:小口徑試管中進行,先加已知血清0.1ml,然後輕輕加入等量抗原,使形成二個介面,數分鐘後,二個介面間形成乳

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