《化妆品紧致功效测试 斑马鱼幼鱼弹性蛋白基因相对表达量测试方法》（征求意见稿）.pdf

ICS71.100.70

X42

团体标准

T/ZHCA

化妆品紧致功效测试-

斑马鱼幼鱼弹性蛋白基因相对表达量

测试方法

Firmnessefficacytestofcosmetics-Testmethodfor

relativeexpressionofelastingeneinzebrafishlarvae

（征求意见稿）

2021-##-##发布2021-##-##实施

浙江省健康产品化妆品行业协会发布

T/ZHCA###-2021

化妆品紧致功效测试

斑马鱼幼鱼弹性蛋白基因相对表达量测试方法

1范围

本文件规定了一种用于评价化妆品紧致功效的检测方法。

本文件适用于化妆品及其原料紧致功效的检测。

有以下特征的受试物不适用于本文件方法：受试物不能溶解于水或不能制备成能在水中均匀分散的悬浮

液。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡

是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T21808化学品鱼类延长毒性14天试验

3术语及定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

最大耐受浓度maximumtoleratedconcentration;MTC

以5dpf的斑马鱼幼鱼未出现死亡（

无心跳）和其他毒性效应（水肿、躯干弯曲、肌肉纹理不清晰、对机械

刺激无反应等）的浓度。

3.2

受精后天数daypost-fertilization;dpf

是指斑马鱼受精卵受精后的天数。

4方法原理

弹性蛋白是皮肤组织中弹性纤维的主要成分，能为肌肤提供结构性支撑，让肌肤免受老化、松弛的困扰，

对于维持组织的弹性和复原力至关重要。

弹性蛋白由二种类型的短肽段交替排列构成，eln1、eln2负责编码弹力蛋白不同的肽段，两个基因共同负

责调控弹力蛋白的表达水平，使皮肤紧致，具有弹性。斑马鱼具有与人相似的弹性蛋白（eln1、eln2）基因。

通过检测斑马鱼eln1、eln2基因相对表达量可表明受试物是否具有紧致功效。

5材料和试剂。

除非另有说明，所用试剂均为分析纯。水为新制蒸馏水或去离子水，pH为6.5~8.5，电导率≤10μS/cm。

T/ZHCA###-2021

5.1斑马鱼幼鱼，野生型AB品系斑马鱼的幼鱼。

5.2标准稀释水，按附录A中描述的方法配制。

5.3阳性对照样品：20mg/mL的肌肽（L-Carnosine，CAS：305-84-0，纯度≥98%）

5.4助溶剂：二甲亚砜（Dimethylsulfoxide，DMSO，CAS号，67-68-5，分析纯试剂）。

TM

5.5iTaqUniversalSYBRGreenSupermix（dsDNA荧光染料）。

5.6FastQuantRTKit（WithgDNase）试剂盒（反转录试剂盒）

5.7RNA-QuickPurificationKit（RNA快速提取试剂盒）。

5.8引物序列：β-actin：上游5’-TCGAGCAGGAGATGGGAACC-3’，下游5’-

CTCGTGGATACCGCAAGATTC-3’；eln1：上游5’-AAAACCAGGTTACGGCTCTGT，下游5’-

TCCTCCTGGATAAGCTCCGTATC；eln2：上游5’-