双特异性抗体制备方法进展.pptxVIP

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2025-02-19 发布于河北
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双特异性抗体制备方法进展.pptx

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双特异性抗体制备方法进展

01PARTONE背景

背景4双特异性抗体：含有2种特异性抗原结合位点的人工抗体，能在靶细胞和功能分子(细胞)之间架起桥梁，激发具有导向性的免疫反应。

背景5双特异性抗体的优势改变特异性免疫应答细胞的方向到癌细胞，增强癌细胞杀伤能力通过和两个不同的细胞表面抗原结合，有效增强癌细胞靶向性降低治疗费用同时阻断两个不同的通路

背景630年前2009年2014年Medarex公司开发出双特异性抗体，并在2001年进行三期临床试验Trion公司研发的Catumaxomab被欧盟批准上市用于治疗EpCAM阳性肿瘤所引起的恶性腹水安进公司研发的Blinatumomab获得FDA的批准，用于治疗费城染色体阴性的复发性或难治性B细胞急性淋巴细胞白血病开发进展

背景7

02PARTONE化学交联

化学交联9Chemicalcross-linking（化学交联）缺点：纯化困难、稳定性差、活性降低制备方法：分别连接交联剂脱盐混合，化学结合

化学交联10ControlledFab-armexchange(cFAE)可控制的Fab臂交换技术制备方法：制备CH3突变的母抗体铰链区链间二硫键还原制备半抗体重新形成二硫键不同半抗体结合优点：可大规模生产（1500L）

03PARTONE杂交瘤细胞技术

杂交瘤细胞技术12Quadromatechnology杂交瘤细胞技术制备方法：融合两个分别表达不同抗体的杂交瘤细胞，两株异源抗体轻重链随机装配，形成混合双功能抗体。重链的正确装配：CH3区小氨基酸突变为大氨基酸CH3区大氨基酸突变为小氨基酸凸出的杵凹陷的臼

杂交瘤细胞技术13优点：保留了Fc段的生物学功能缺点：轻链也会随机装配，这是我们不想要的两类抗体使用序列相同的轻链，这种轻链可以和两类抗原结合双细胞系分别表达半抗体结合crossmab技术（把重链CH1区和轻链CL区交换）和knobs-into-holes技术在VH-VL和CH1-CL的内表面引入新的突变避免轻链的随机装配的方法

杂交瘤细胞技术14主要药物Catumaxomab第一个上市的双功能抗体（2009）靶标：CD3+EpCAM适应症：恶性腹水FBTA05：CD3+CD20，临床1-2期Ertumaxomab：CD3+Her2，临床2期

04PARTONE基因工程制备

基因工程制备16

GeneticengineeringofBsAbs

基因工程制备双特异性抗体

利用分子克隆技术，可将一个抗体的部分/全部恒定区用于构建双特异性抗体。Ig-G样形式：指BsAbs中含有Fc段（保留了Fc介导的效应器功能）非Ig-G样形式：不含Fc段

基因工程制备17Ig-G样形式（含Fc段）：

基因工程制备18非Ig-G样形式优势：抗体尺寸更小具有更好的肿瘤组织渗透性每个亲本单克隆抗体的可变区和接头均可被克隆和连接。

基因工程制备19

非Ig-G样形式——串联scFv

通过额外的肽接头如甘氨酸-丝氨酸重复基序连接的两scFv片段最常用的结构域顺序：VLA-linker1-VHA-linker2-VHB-linker3-VLB接头1和接头3的长度决定了scFv的聚合情况接头2决定了两个scFv之间的运动灵活性（VL和VH衍生自单链抗体片段;A和B代表亲本单克隆抗体A和B）

基因工程制备20

非Ig-G样形式——Blinatumonmab

已上市，最着名的双特异性T细胞衔接器（BiTEs）之一在大肠杆菌中不易表达，但在哺乳动物细胞中表达良好靶点：CD3+CD19两个较长的接头被置于轻链和重链之间，短接头以串联形式桥接两个scFv短链接头阻止VL和VH结构域的链内而非链间配对，长接头允许抗原结合位点自由旋转

基因工程制备21四价串联双抗体（Tand-Abs）含有连接在单个多肽链中的两对VL和VH结构域在表达时，两种多肽产物以头对尾的方式二聚化，形成具有大分子量（?105kDa）的同源二聚体药物AFM11是一种靶向CD19和CD3的四价双特异性TandAb，其在小鼠静脉内给药后的半衰期为18.4至22.9小时（Ⅰ期临床试验中）AFM13（进入Ⅱ期临床试验）

基因工程制备22半衰期延长策略多聚化与PEG链共轭连接（PEG化）与人血清白蛋白（HSA）融合与Fc片段融合