中山大学药学院 生物技术制药课件第2章基因工程制药.pptVIP

基因工程制药-1

geneticengineeringpharmaceutics

2025-2-181

Ø基因工程（GeneEngineering):

l基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工

的.

其基本步骤

Ø(1)提取目的基因.

Ø(2)目的基因与运载体结合.

形成一个重组DNA分子.

Ø(3)将目的基因导入受体细胞.

Ø(4)目的基因的表达.

Ø基因工程技术最成功的成就:用于新型生物技术药

物的研制

2025-2-182

载体DNA

(限制性内切酶切开)目的基因

重组体

宿主细胞

已转化的宿主细胞

繁殖

阳性克隆株

2025-2-183

表达

一、基因工程菌的构建与筛选

（一）工具酶

1、限制性核酸内切酶

Ø是一类能识别特殊核甘

酸序列，并水解DNA分子

的磷酸二酯键,从而切断

双链DNA的核酸水解酶。

Ø主要存在于原核细菌中，

帮助细菌限制外来DNA的

入侵作用。

2025-2-184

4

1）II型限制性内切酶的基本特征

ØⅡ型酶

ü识别位点是一个回文对称

EcoRI的识别序列

结构，并且切割位点也在

这一回文对称结构上。5‘…GCTGAATTCGAG…3’

3‘…CGACTTAAGCTC…5

ü许多Ⅱ型酶切割ＤＮＡ后，

可在ＤＮＡ上形成粘性末ØEcoRI的切割位点

端，有利于ＤＮＡ片段的

重组。

2025-2-185

5

2）核酸内切酶作用后的断裂方式

粘性末端：

2025-2-186

6

平末端：

2025-2-187

2025-2-188

3）同裂酶（isoschizomers)

Ø指来源不同但识别相同靶序列的核酸内切酶。

l同裂酶进行同样的切割，产生同样的末端。但有些同裂

酶对甲基化位点的敏感性不同。

ØExample:

l限制酶HpaⅡ和MspⅠ是一对同裂酶(CCGG)，当靶序列中

一个5-甲基胞嘧啶时HpaⅡ不能进行切割，而MspⅠ可以。

lSmaI(SerratiamarcescensSB)

CCC^GGG

lXmaI(Xanthomonasmalvacaerum)

C^CCGGG

2025-2-189

4）同尾酶（isocaudamer）

Ø指来源不同、识别靶序列不同但产生相同的粘性末

端的核酸内切酶。

•相同的粘性末端称为配伍未端(compatible

end)。

。