毒素凝胶法检查.ppt

当溶液A、D均为阴性；溶液C均为阳性时，试验有效溶液B系列中，第一个出现阳性结果的浓度即初步将其判断为样品的无干扰浓度。本试验中的样品无干扰浓度为≥S40溶液编号AD溶液内容S20S40S80S160S320W平行管溶液编号BC溶液内容S20E2λS40E2λS80E2λS160E2λS320E2λE2λ平行管--++----------++++++--++通过比较鲎试剂与内毒素在水溶液和供试品溶液中反应的差异程度，来确定供试品在该浓度下是否对BET检查有干扰。1至少对3批样品进行干扰试验。201供试品限值的确定02鲎试剂的选择03最大有效稀释倍数的确定04反应溶液的制备05加样及反应06结果判断硫酸庆大霉素，20000U/ml；药典要求内毒素限值L=0.5EU/1000U2）试剂的选择根据干扰初筛试验的结果，供试品在40倍稀释（对应鲎试剂灵敏度为0.25EU/ml）时无干扰一般不选择第一个出现阳性结果的供试品浓度作干扰试验。这里我们选择灵敏度为0.125EU/ml的鲎试剂进行干扰验证试验。试剂名称厂家规格标示效价数量TAL安度斯0.1ml/支0.125EU/ml36内毒素标准品（CSE）安度斯10ng/瓶10EU/ng（CoA）1BET（水）安度斯50ml/瓶0.003EU/ml1MVD=cL/λ=80（倍）4）各反应溶液的制备溶液编号CD溶液内容E0.25E0.125E0.06E0.03W平行管溶液编号BA溶液内容S80E0.25S80E0.125S80E0.06S80E0.03S80平行管30s0.4ml0.12530s30s30s1000.4mlCSEBET水1.0ml100.50.251.8ml1.8ml1.8ml1.8ml1.8ml3.6ml1.8ml30s1.03.6ml0.0630s1.8ml1.8ml30s1.8ml1.8ml0.03(EU/ml)稀释溶液C混合5分钟S原液0.3ml2.7mlWS101ml3mlWS400.6ml0.6mlWS80硫酸庆大霉素S0.3mlS102.7ml1.0ml3.0ml溶液A：S80BET水0.6ml0.6mlS40E0.5S400.5ml0.5mlS80E0.25E0.25S400.5ml0.5mlS80E0.125E0.125S400.5ml0.5mlS80E0.06E0.06S400.5ml0.5mlS80E0.03开启36支鲎试剂，先分别用0.1mlBET水复溶,再分别加相应的溶液0.1ml（A、B、C和D）37±1℃反应60±2分钟0.25EU/ml(2λ)0.125EU/ml(λ)0.06EU/ml(?λ)0.03EU/ml(?λ)BET水S80E0.25(SE2λ)S80E0.125(SEλ)S80E0.06(SE?λ)S80E0.03(SE?λ)S80反应结果溶液编号C（Es系列）D溶液内容E0.25E0.125E0.06E0.03W平行管溶液编号B（Et系列）A溶液内容S80E0.25S80E0.125S80E0.06S80E0.03S80平行管－－－－－－－－－－－－－－－－－－－+++++++++++++++++**凝胶法BET检查技术湛江安度斯生物有限公司2009年3月01凝胶法BET试验程序02试验器具03鲎试剂灵敏度复核04干扰初筛试验05干扰试验06检查法07实验相关知识及技巧1、凝胶法BET的实验程序*Page*01试验准备02确定供试品的内毒素限值03选择鲎试剂04计算最大有效稀释倍数或最低有效浓度05鲎试剂灵敏度复核06干扰初筛试验07干扰试验08日常检查试验器具的要求及处理玻璃器皿需