微生物工程省公开课一等奖全国示范课微课金奖课件.pptx

一个枯草芽孢杆菌发酵培养基设计与优化设计一个以花生壳、玉米芯和豆粕为原料枯草芽孢杆菌发酵培养基并经过正交优化试验对该发酵培养基进行优化。结果表明在培养基中豆粕液浓度为30g/L花生壳浓度为10g/L玉米芯浓度为2g/L接种量为5情况下采取此种配比发酵培养基37℃过夜培养菌体生长量到达最大所测OD600值可到达1.122。一个枯草芽孢杆菌发酵培养基设计与优化设计一个以花生壳、玉米芯和豆粕为原料枯草芽孢杆菌发酵培养基并经过正交优化试验对该发酵培养基进行优化。结果表明在培养基中豆粕液浓度为30g/L花生壳浓度为10g/L玉米芯浓度为2g/L接种量为5情况下采取此种配比发酵培养基37℃过夜培养菌体生长量到达最大所测OD600值可到达1.122佳第1页

介绍:我国是一个农业大国花生、玉米、大豆都是比较主要农作物产量极大。我国对于这三种原材料利用与开发正在逐步发展中相对来说还有很大空间充分发掘它们用途含有很大意义。枯草芽孢杆菌Bacillussubtitles是饲用微生态制剂惯用菌种之一芽孢杆菌在成熟期以孢子状态存在含有天然耐酸和耐胆盐等优点。枯草芽孢杆菌经过定植到目标动物肠道中经生物氧作用颉颃致病微生物并产生各种消化酶及各种营养物质产生有益代谢产物不但改善原料风味更主要是它可调整消化道健康增强动物体免疫功效最终预防疾病发生到达促进目标动物生长和提升饲料转化率目标。对促进营养消化吸收、提升饲料转化率、防病和促进生长起主要作用因而被研制成饲用微生态制剂。碳源和氮源是微生物细胞和代谢产物主要营养物质也是发酵培养基主要组成部分。发酵培养基配方是影响微生物发酵主要原因之一。第2页

1材料1.1菌株枯草芽孢杆菌1.2仪器电子分析天平低温冰箱不锈钢手提式压力蒸汽灭菌器超净工作台紫外可见分光光度计恒温振荡器生化培养箱移液枪规格1ml-200μl1.3试剂1.3.1试验材料花生壳、玉米芯、豆粕然后将花生壳和玉米芯烘干后粉碎用40目筛子筛选得较小颗粒原料。第3页

1.3.2种子培养基葡萄糖20g蛋白胨15g氯化钠5g牛肉膏0.5g琼脂20g加蒸馏水至1L溶解用NaoH将pH值调至6.8-7.0。1.3.3基础发酵培养基葡萄糖20g蛋白胨15g氯化钠5g牛肉膏0.5g加蒸馏水至1L溶解用NaoH将pH值调至6.8-7.0。2方法2.1枯草芽孢杆菌种子液制备1配制好种子培养基121℃高压蒸汽灭菌20min待温度降低后倒平板。恒温培养箱培养24h后观察是否有杂菌污染若未污染则将枯草芽孢杆菌从保留斜面转接于新鲜种子培养基。于37℃恒温培养16h。置4℃冰箱保留备用。第4页

2配制好基础发酵培养基灭菌后取培养好菌种接种于盛有100ml无菌种子培养基500ml三角锥形瓶中置摇床37℃振荡培养过夜转速为120r/min。置4℃冰箱保留备用。2.2碳源单原因试验分别以花生壳、玉米芯做为碳源进行枯草芽孢杆菌单原因试验。以基础发酵培养基为对照将其中碳源葡萄糖分别用不一样量花生壳和玉米芯替换(如表1所表示)按5%接种量将种子液接入盛有20ml培养基100ml三角锥形瓶中于37℃转速为120r/min摇床培养过夜。测定其菌体生长量。进行3次重复试验结果为3次重复试验平均值。第5页

2.3氮源单原因试验用豆粕作为氮源进行枯草芽孢杆菌单原因试验。一样用基础发酵培养基做对照将其中氮源蛋白胨用不一样量豆粕替换（见表1）其他操作同上碳源单原因试验。进行3次重复试验试验结果为3次试验平均值。2.4正交优化试验设计试验选择花生壳玉米芯作碳源豆粕作氮源按正交设计表L9（3^4）安排试验7-9(见表2)发酵条件温度37℃初始pH7.0120r/min振荡培养100ml摇瓶装液量20ml。pH6.8~7.0121℃灭菌20min（10-12）。重复3次试验试验结果为3次重复试验平均值。第6页

2.5菌体浓度测定本试验采取紫外吸光光度法测定取适量培养液以对应未接种培养基作为空白调零测定各培养基经培养后在波长600nm处吸光值。未接种培养基需与接种培养基保持一致环境条件即相同培养条件下培养相同时间。3结果3.1花生壳玉米芯（碳源）对菌体生长量影响以15g/L蛋白胨为氮源分别添加0、1g/L、5g/L、10g/L、20g/L、25g/L花生壳和0、2g/L、44g/L、10g/L、15g/L、20g/L玉米芯进行试验并用基础发酵培养基作对照。结果如图1图2随花生