植物脱毒技术.pptVIP

试验母株在高温生长室中生长一段时间，其顶端分生组织比次生分生组织生长迅速，后切取其茎尖分生组织进行离体培养。生长室温度35-40℃光照3000—10000lx020301热空气处理脱毒法热处理，可通过热水或热空气进行。热水对休眠芽效果较好；热空气对活跃生长的茎尖效果较好，既能消除病毒，又能使寄主植物又较高的存活机会。热空气处理比较容易进行：把旺盛生长的植物移入到一个热疗室中，在35~40℃处理一定时间即可。处理时间的长短，可由几分钟到数周不等。热处理时，最初几天空气温度应逐步增高，直到达到要求为止。若钝化病毒所需要的连续高温处理会伤害寄主组织，则应当试验高低温交替的效果。在热处理期间应当保持适当的湿度和光照。而且要对植物进行修剪，以增加植物忍受热处理的能力。热处理后只有小部分植株能够存活。极易使植物材料受热枯死，造成损失优点:方法简单，效果明显。具有局限性，不能去除所有病毒。只对圆形病毒（苹果花叶病毒），或对线状病毒（马铃薯卷叶病毒）有效；而对杆状病毒（千日红病毒）无效。缺点:延长热处理时间，病毒钝化效果好，同时也可能会钝化植物组织中的抗性因子而降低处理效果。热处理的优缺点和单独采用热疗法相比，茎尖培养具有更广泛的适用性。很多不能由单独的热处理消除的病毒，可以通过茎尖培养和热处理相结合，或单独的茎尖培养而消除。因而，茎尖培养现在已经成为消除病毒的一个很常用的手段。1原理及依据2病毒在植物体内分布不均，茎尖处含量最少3病毒DNA分子与细胞分裂蛋白质合成竞争4操作程序5外植体经表面消毒灭菌后，在解剖镜下，经无菌操作切取小茎尖，接种到备用培养基上，放入培养室内进行培养，并及时观察和记录培养结果。12、4通过茎尖培养消除病菌12、4、1外植体名称在应用组织培养方法以获得无病菌植物时，所用的所用的外植体可以是茎尖，也可以是茎的顶端分生组织。在这里，顶端分生组织是指茎的最幼龄叶原基上方的一部分，最大直径约为100um，最大长度约为250um。茎尖是由顶端分生组织及其下方的1-3个叶原基一起构成的（如图13、2），虽然通过顶端分生组织培养消除病毒的机会较高，但在大多数已发表的的工作中，无毒植物都市通过茎尖培养得到的。解剖镜（体视显微镜），解剖针，解剖刀。为了防止茎尖变干，要在衬有无菌湿滤纸的培养皿内进行解剖。01茎尖外植体要用75％酒精浸蘸一下或0.1％的次氯酸钠消毒（10分钟）。0212、4、2剥取茎尖的方法在剖取茎尖时，要把茎芽置于解剖镜下，一手用一把细镊子将其按住，另一手用解剖针将叶片和叶原基剥掉。当形似一个透明闪亮的半球形顶端分生组织暴露出来之后，用一个锋利的长柄刀片将分生组织切下来，上面可以带有叶原基，也可不带，然后用同一工具接种到培养基上。对于难以生根的要嫁接到健康的砧木上。1注意，不要太大，以免带有较老的组织。2取样与消毒可直接选定的植株上取顶芽进行消毒接种。采顶芽与侧芽消毒接种。消毒方法是：剪取顶芽梢段3、5厘米，剥去大叶片，用自来水冲洗干净，在75%酒精中浸泡30秒左右，用1%-3次氯酸钠或5%-7%的漂白粉溶液消毒10-20分，最后用无菌水冲洗材料4-5次。1、茎尖脱毒方法酒精擦拭手外植体消毒浸泡5min器械消毒酒精灯灼烧酒精擦拭培养皿茎尖剥离和接种将已消毒的芽放在带滤纸的培养皿上—器械固定—解剖镜下剥去幼叶—切下带1-2个叶原基的生长点（）—切下的茎尖转至培养基上（顶部向上）。酒精擦拭旋转灼烧显微镜下获取茎尖接种盖好瓶塞脱毒马铃薯试管苗培养诱导生根的方法是将2-3cm高的无根苗转入生根培养基继续培养1-2个月可生根。25+2℃，1500-5000LX，10-16h生根诱导一般光照培养比暗培养效果好。其间应更换新鲜培养基。提高培养基中BA的浓度可形成大量从生芽。12、4、3在茎尖中影响脱毒效果的因素培养基MS培养基是常用的较好的适于茎尖培养的培养基之一。下表是几种常用于茎尖培养的培养基。虽然较大的茎尖外植体（500μm）或更长在不含生长调节剂的培养基中也能产生一些完整的植株，但一般来说，含有少量（0.1－0.5mg/L的生长素或细胞分裂素或二者皆有常常是有利的。在各种不同的生长素中，应当避免使用2，4－D，因为它通常能诱导外植体形成愈伤组织，广泛使用的生长素是NAA和IAA，其中NAA由于比较稳定，效果更好。第十二章植物脱毒技术目的与要求了解脱毒意义，学习植物茎尖脱毒原理及其操作程序，了解其他组织脱毒方法及应用，掌握植物理化脱毒方法。学习植物脱毒苗的鉴定方法，掌握各方法的鉴定原理，了解植物脱毒苗的保存和繁殖方法。具备植物茎尖脱毒技术基础，具有指示植物