第三章紫外可见分光光度法叶桦珍福建卫生16课件.pptx

第三章紫外可见分光光度法叶桦珍福建卫生职业技术学院

教学目标掌握光的吸收定律，定量分析方法熟悉紫外-分光光度计的操作了解紫外-可见分光光度计的结构及工作原理

第一节基本原理

（一）透光率一、透光率与吸光度（二）吸光度??溶液吸光示意图

二、光的吸收定律（朗伯比尔定律）

当用一束强度为I0的单色平行光垂直通过均匀无散射的稀溶液时，溶液的吸光度A正比于溶液的厚度L和溶液中吸光物质的浓度c的乘积。其数学表达式为：二、光的吸收定律（一）朗伯-比尔定律的内容A=KLc

（二）朗伯-比尔定律适用范围及应用条件应用朗伯-比尔定律必须满足以下条件：（1）入射光为单色光；（2）被测样为均匀介质；（3）测定过程中，吸光物质之间不能发生相互作用。

（三）吸光度的加合性吸光度具有加和性。在某一波长处，如果试样中同时存在几种吸光组分，则在该波长处测得的吸光度为各吸光组分吸光度的总和。

（四）偏离光的吸收定律的因素1．溶液浓度偏高2．溶液组成发生改变3．非单色光入射4．非均相体系

三、吸光系数

(一）吸光系数的表示方法1.比吸光系数?

2.摩尔吸光系数当溶液浓度采用mol/L为单位，液层厚度采用cm为单位时，K用另一符号ε来表示，ε即为摩尔吸光系数，单位为L/（mol·cm），其物理意义为质量浓度为1mol/L，液层厚度为1cm时溶液的吸光度值，朗伯-比尔定律表达式为：A=εLc

四、紫外吸收光谱

（一）吸收光谱曲线及相关术语在溶液浓度、液层厚度一定时，测定溶液对不同波长单色光的吸光度，以波长（λ）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标绘制曲线，所得到反映吸光度随波长变化情况的曲线称为吸收光谱曲线。吸收光谱曲线示意图

（二）吸收光谱曲线的特点不同的物质吸收光谱曲线形状和最大吸收波长位置不同；同一物质不同浓度溶液的吸收光谱形状一致，最大吸收波长一致，但吸光度随浓度的增大而增大。