《重组DNA技术》课件2.pptVIP

重组DNA技术重组DNA技术是现代生物技术的重要组成部分，它使科学家能够将来自不同生物体的DNA片段结合在一起，创造新的基因组合。重组DNA技术广泛应用于医学、农业、工业等领域，为人类带来了巨大的益处。

什么是DNA重组技术DNA重组技术概述DNA重组技术是指利用生物技术手段，将不同来源的DNA片段进行切割、连接，构建新的DNA分子，并将其导入受体细胞，从而改变受体细胞的遗传特性，获得新的生物类型或产品。关键技术该技术涉及限制性内切酶、DNA连接酶、载体、转化等关键技术，用于切割、连接和导入DNA片段。应用领域DNA重组技术已广泛应用于医药、农业、工业等领域，例如生产药物、抗生素、疫苗，提高作物产量，开发新的生物材料等。

DNA结构与功能DNA是脱氧核糖核酸，是生物体遗传信息的载体。它由两条反向平行的脱氧核苷酸链组成，通过氢键连接在一起形成双螺旋结构。DNA分子中包含四种碱基：腺嘌呤（A）、鸟嘌呤（G）、胞嘧啶（C）和胸腺嘧啶（T）。A与T配对，G与C配对，形成碱基对，并通过磷酸二酯键连接在一起形成核苷酸链。DNA的功能主要包括遗传信息的储存、复制和传递。DNA通过复制将遗传信息传递给下一代，并通过转录和翻译过程指导蛋白质的合成。

DNA复制的机制1解旋DNA双螺旋结构首先解开，形成两个单链模板。2引物合成引物酶合成短的RNA引物，为新的DNA链提供起始点。3延伸DNA聚合酶沿着模板链移动，添加新的核苷酸，形成互补的DNA链。4连接DNA连接酶将新合成的片段连接起来，形成完整的DNA双螺旋结构。

限制性内切酶切割DNA的特异性酶识别并切割特定DNA序列，为基因工程提供了精确操作的工具。识别位点每个限制性内切酶都有其独特的识别序列，确保在基因组中精准切割。DNA片段分析切割后的DNA片段可通过凝胶电泳进行分离和分析，为基因克隆奠定基础。

DNA连接酶催化形成磷酸二酯键DNA连接酶可以将两个DNA片段连接起来，形成一个完整的DNA分子。DNA连接酶的种类T4DNA连接酶E.coliDNA连接酶

质粒质粒是一种存在于细菌、酵母菌等生物细胞中，独立于染色体外的遗传物质。质粒是闭环的双链DNA分子，具有自主复制能力，能稳定地遗传给子代细胞。在基因工程中，质粒是常用的载体，可以将外源基因插入质粒中，并将其导入宿主细胞，实现基因的克隆和表达。

质粒的构建1选择合适的质粒根据目的基因的大小和载体功能选择质粒2目的基因的插入利用限制性内切酶将目的基因插入到质粒的特定位点3连接反应使用DNA连接酶连接目的基因和质粒4转化将重组质粒导入宿主细胞

基因克隆的基本步骤目的基因的获取从生物体中分离出所需的基因，可以采用提取基因组DNA，构建基因文库或利用PCR技术等方法获取。基因的连接将目的基因连接到合适的载体上，形成重组DNA分子，常用的载体包括质粒和病毒等。重组DNA的导入将重组DNA分子导入受体细胞，常用的方法包括转化、转染、显微注射和基因枪等。筛选与鉴定筛选出含有目的基因的受体细胞，并对其进行鉴定，确保目的基因成功整合到宿主细胞的基因组中。表达与应用将含有目的基因的细胞进行培养，使其表达目的基因编码的蛋白质，并根据需要进行应用。

转基因生物定义转基因生物是指利用基因工程技术将外源基因导入生物体，并使外源基因在生物体内稳定表达的生物。通过转基因技术，可以改变生物的性状，比如提高产量、增强抗病性、改善营养成分等。例子抗虫棉抗除草剂大豆高产水稻耐盐作物

基因导入的方法11.病毒载体法利用病毒的感染性，将外源基因导入靶细胞。22.脂质体法将外源基因包裹在脂质体中，通过细胞膜进入细胞。33.显微注射法用显微注射器将外源基因直接注射到细胞核中。44.电穿孔法利用电脉冲使细胞膜暂时变得通透，外源基因得以进入。

蛋白质工程定向进化通过模拟自然选择过程，对蛋白质进行随机突变和筛选，以获得具有预期功能的突变体。理性设计基于对蛋白质结构和功能的理解，进行有针对性的突变或改造，以改善蛋白质的性能。组合化学利用化学合成的方法，快速构建大量蛋白质变体，并进行筛选，以发现具有最佳性能的突变体。

多肽合成技术化学合成方法化学合成方法通过逐步连接氨基酸来合成多肽，适用于短肽的合成，可以精确控制氨基酸序列。生物合成方法生物合成方法利用生物体内的蛋白质合成系统，通过基因工程技术表达目的基因，生产所需的多肽。

PCR扩增技术1变性将DNA模板加热至95℃，使双链DNA解链。2退火温度降至50-65℃，引物与模板DNA互补配对。3延伸温度升至72℃，DNA聚合酶催化引物延伸，合成新的DNA链。PCR扩增技术是一种体外扩增特定DNA片段的技术，应用范围广泛。该技术需要引物、模板DNA、dNTPs和DNA聚合酶等试剂。通过反复循环变性、退火和延伸三个步骤，可以将目标DNA片段指