植物组织培养常规技术.pptVIP

表面灭菌方法灭菌剂的使用#2022（四）接种室环境灭菌经常打扫，保持清洁；接种室消毒：?室内空气消毒：?熏蒸灭菌法?紫外灯照射灭菌?喷雾降尘?室内地面、墙壁、桌面等：用消毒液（2%的新洁尔 或70%的酒精）擦拭灭菌。?接种台消毒: ?紫外灯照射?70%-75%的酒精喷雾或擦拭台面。使用超净工作台:超净工作台添加标题粗过滤器添加标题高效过滤器添加标题操作台面添加标题使用超净工作台应注意的问题?超净工作台不应安装在尘埃太多的地方。?在使用前应预热30-40分钟。?操作前应先将实验材料和操作器械、药品等物品事先放入台内，不要中途拿进。?台面上放置的东西不宜太多，特别是注意不要把东西迎面堆的太高，以免挡住气流。?定期检查，更换过滤器。（六）接种器械的灭菌灭菌方法灼烧灭菌法：使用前插入70%或95%的酒精中浸一下，然后放 酒精灯火焰上灼烧。应注意的问题灼烧应均匀充分；灼烧一次不宜使用过久，应多次反复灼烧；灼烧后冷却再用。采用灭菌器灭菌（五）培养室环境灭菌定期打扫，保持整洁；地面、墙壁、培养架以及其他器材表面：用消毒剂进行擦洗或喷雾：酒精、来苏儿水、新洁尔灭。空气灭菌：?紫外灯照射；?定期熏蒸灭菌（改用乙二醇）?喷雾灭菌。湿度不宜过大（60%-80%）。（七）操作人员的无菌操作进入接种室前应洗净双手，穿好工作服，戴好工作帽和口罩。接种操作前用75%的酒精擦拭双手。接种操作时要端座，不要俯身工作台，口鼻远离接种区（如瓶口），尽量不要讲话。打开培养瓶口（拔棉塞时和盖棉塞时）前和盖盖之前，坚持灼烧培养瓶口和盖口（或棉塞），将微生物固定，防止进入瓶内。接种过程中手臂切忌从培养基、无菌材料、接种器械等物品上方经过，以免引起污染。当培养容器敞着口时，应倾斜瓶口防止污染物进入培养容器。第三节培养基及其配制基本培养基与完全培养基培养基的作用培养基的组成及其作用无机元素有机营养植物生长调节物质附加物类培养基的酸碱度和渗透压培养基种类及其特点培养基的配制基本培养基与完全培养基维生素、氨基酸糖、淀粉椰乳、苹果汁、香蕉泥植物激素C、H、O、NS、P、B、I抗生素K+、Ca2+、Mn2+Mg2+、Zn2+炭粉基本培养基完全培养基根据植物所需浓度分为大量元素（0.5mmol/L）和微量元素（1）大量元素种类：C、H、O、N、S、P、K、Ca、Mg等。作用：N元素：组培中利用的无机氮主要有硝态氮(NO3-)和铵态氮(NH4+)两种形式.应注意：A.培养基中一般硝酸盐和铵盐按一定比例配合使用，两者比例大小应根据植物种类做适宜调整。B.培养基中硝酸盐和铵盐各自的含量过高或过低或比例不当，均不利于培养物的培养(一般硝酸盐≥25mmol/L,铵盐＜8mmol/L)。（一）无机元素（2）微量元素单击此处可添加副标题种类：主要包括Fe、Cu、Mn、Zn、Mo、Na、Co、B、I等。作用：微量元素在植物生命活动过程中，多以酶系中的辅基形式起着重要作用。使用中应注意的问题?若使用量过大，常会引起植物细胞酶系失活、代谢障碍、蛋白质变性以及组织死亡等毒害现象。?来源问题?不同培养基配方中的用量差别很大植物组织培养常用培养基中离子浓度的比较单击此处添加大标题内容植物组织培养常用培养基中离子浓度的比较NO3mmol/L3.3339.4133.7925.0018.4027.99NH4??20.6215.002.009.007.01总N?3.3360.0348.7927.0327.4035.00P?0.141.252.501.080.502.94K?1.6620.0521.2925.009.9030.93Ca?1.272.992.991.021.491.13Mg?3.041.501.501.000.750.75Cl?0.875.985.982.042.992.26Feμmol/L12.50100.00100.0050.10100.00100.00S?4502.001730.001610.002079.90996.804379.13Na?2958.00202.00237.201089.00