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热稳定α-淀粉酶的校准和稀释

A.1试剂或材料

除非另有规定，仅使用分析纯试剂。

A.1.1水：GB/T6682，三级。

A.1.2中性洗涤溶液：量取500mL水于1000mL烧杯中，加入18.6g乙二胺四乙酸二钠

(CHNONa·2HO)）、4.56g无水磷酸氢二钠（NaHPO）和6.81g四硼酸钠

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（NaBO·10HO)，加热溶解，混匀，置于通风橱中。加入30g十二烷基硫酸钠

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（CHNaOS)，溶解后加入10mL二缩三乙二醇（(CHO)消除泡沫，加水至约950mL，

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搅拌均匀，用浓盐酸或氢氧化钠将pH调至6.95～7.05，用水稀释至1000mL。室温保存。

A.1.3碘溶液：称取2g碘化钾、1g碘，溶于100mL水，混匀，贮存于棕色瓶中。

A.1.4生玉米粉：取约100g水分含量低于14％的生玉米，粉碎使其全部通过1.00mm孔径

分析筛，混匀，装入密闭容器中，备用。

A.1.5玻璃纤维。

A.2仪器设备

A.2.1分析天平：精度0.0001g。

A.2.2回流消煮装置：配有600mL烧杯、独立加热单元和适配600mL烧杯的水冷凝器。

A.2.3冷水浴：可保持在1℃及以下。

A.2.4恒温水浴：可保持温度为20℃±0.5℃。

A.2.5pH计：精度0.01。

A.3试验步骤

A.3.1称取0.5g±0.005g生玉米粉（A.1.4）6份，分别置于6个烧杯（A.2.2）中，加入50mL

中性洗涤溶液（A.1.2），摇匀。量取50mL中性洗涤溶液（A.1.2），置于100mL烧杯中，

加入0.10mL热稳定α-淀粉酶，摇匀，作为试剂空白。

A.3.2将6个烧杯（A.2.2）连接到回流消煮装置上，加热，5min内煮沸，向6个烧杯

（A.2.2）中分别加入0mL、0.025mL、0.05mL、0.10mL、0.20mL、0.40mL热稳定α-淀粉

酶，回流消煮10min，1min内全部取下，分别再次加入0mL、0.025mL、0.05mL、0.10

mL、0.20mL、0.40mL热稳定α-淀粉酶，摇匀，用最少量的中性洗涤溶液（A.1.2）冲洗烧

杯壁，让热稳定α-淀粉酶反应60s，消煮液通过玻璃纤维（A.1.5）过滤至100mL烧杯。

A.3.3将6个消煮液放入冷水浴中，冷却，5min后取出，置于20℃±0.5℃水浴中，当消煮

液达到20℃±0.5℃时，取出烧杯，并在白色背景下按添加热稳定α-淀粉酶剂量的顺序排列。

A.3.4在试剂空白和6个消煮液中快速加入0.5mL碘溶液（A.1.3），混匀，90s后，从上部

观察烧杯中溶液的颜色，按下述规定对每种溶液的颜色快速作出判断：

——溶液呈紫色表示酶的量严重不足；

——溶液呈浅琥珀色或琥珀色表示酶的量仍然不够；

——溶液呈浅黄色则表示酶的量足够，记录与之对应的A.3.2添加的热稳定α-淀粉酶体

积。

注：用空白作为对照，热稳定α淀粉酶溶液的棕色不与浅琥珀色或琥珀色混淆。

A.3.5如果颜色差异不明显，自置于20℃±0.5℃水浴中开始，按A.3.3和A.3.4重复操作。如

果结果为全部过量或全部不足，或需要计算更加精确的热稳定α-淀粉酶溶液使用量，可适当

改变添加热稳定α-淀粉酶体积和梯度，重新校准。

A.3.6新的热稳定α-淀粉酶溶液应校准。如果在一段时间内使用同一批热稳定α-淀粉酶，则

应每6个月校准1次活性。

A.3.7使用前按照表A.1稀释热稳定α-淀粉酶，保证稀释后的2mL热稳定α-淀粉酶溶液可以

除去0.5g生玉米粉中的淀粉。稀释后的热稳定a-淀粉酶溶液2℃～8℃保存，有效期不超过

5d。

表A.1热稳定α