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鉴别犬瘟热病毒强弱毒株SYBRGreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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鉴别犬瘟热病毒强弱毒株SYBRGreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法的建立

摘要：犬瘟热病毒（CDV）作为一种高度传染性的犬类疾病病原体，其毒株的强弱对疾病的发生和防治具有重要意义。本论文旨在建立一种基于SYBRGreenⅠ荧光定量RT-PCR技术，对犬瘟热病毒强弱毒株进行快速、准确鉴别的检测方法。通过优化引物设计、反应条件及数据处理，成功建立了该检测方法，并通过与现有检测方法的比较，验证了其高效性和特异性。该方法为犬瘟热病毒的快速检测和流行病学调查提供了有力工具，对防控犬瘟热疫情具有重要意义。

犬瘟热病毒（CanineDistemperVirus,CDV）是一种影响犬类的急性、高度传染性疾病。CDV具有多种毒株，其中强弱毒株对疾病的发生、传播及防治具有重要影响。目前，犬瘟热病毒的检测方法主要有酶联免疫吸附试验（ELISA）、间接免疫荧光试验（IFA）等，但这些方法存在操作复杂、灵敏度低、特异性差等缺点。荧光定量RT-PCR技术因其灵敏度高、特异性强、快速等优点，在病毒检测中得到广泛应用。本研究旨在建立一种基于SYBRGreenⅠ荧光定量RT-PCR技术，对犬瘟热病毒强弱毒株进行快速、准确鉴别的检测方法，为犬瘟热病毒的防控提供技术支持。

一、1.研究背景与意义

1.1犬瘟热病毒概述

犬瘟热病毒（CanineDistemperVirus，CDV）是一种单链RNA病毒，属于副粘病毒科。该病毒主要感染犬科动物，包括犬、狐狸、狼等，对幼犬的致死率极高。CDV的病毒颗粒呈球形，直径约为150-200纳米，具有高度传染性和致病性。病毒的主要宿主为犬，感染后可引起犬瘟热，这是一种急性、高度传染性的疾病，对犬类健康构成严重威胁。

CDV感染犬类后，病毒首先在鼻咽黏膜上皮细胞中复制，随后通过血液循环扩散至全身各个器官。犬瘟热的主要症状包括高热、呼吸困难、腹泻、呕吐、咳嗽、流鼻涕等。据世界动物卫生组织（OIE）统计，全球每年约有数百万只犬因感染CDV而死亡。在未接种疫苗的犬群中，犬瘟热的死亡率可高达80%以上。此外，CDV还可导致犬类出现神经症状，如癫痫发作、抽搐等，严重者可导致死亡。

CDV的传播途径多样，主要通过空气飞沫、直接接触、污染的物品等途径传播。病毒对环境的抵抗力较强，在适宜的温度和湿度条件下，病毒可在环境中存活数周。此外，CDV还可通过胎盘垂直传播给胎儿，导致胎儿感染。CDV的流行病学特点表现为季节性、地区性和周期性。在寒冷季节，犬瘟热的发病率较高，尤其是在犬只密度大的地区，疫情更容易爆发。例如，2018年冬季，我国某地区发生了一次大规模的犬瘟热疫情，导致数百只犬死亡，给当地犬类养殖户带来了巨大的经济损失。

近年来，随着犬瘟热疫苗的研发和应用，犬瘟热的防控取得了显著成效。然而，由于CDV毒株的变异和免疫逃逸现象，犬瘟热依然对犬类健康构成严重威胁。因此，深入研究CDV的致病机制、传播途径和防控策略，对于保障犬类健康和公共卫生具有重要意义。

1.2犬瘟热病毒的流行病学特点

(1)犬瘟热病毒的流行病学特点表现为广泛的地理分布和高度传染性。该病毒在全球范围内广泛流行，尤其在发展中国家，犬瘟热疫情较为严重。据世界动物卫生组织（OIE）报道，犬瘟热病毒已传播至全球150多个国家和地区，对犬类健康构成严重威胁。犬瘟热病毒主要通过直接接触感染犬的分泌物、排泄物，或者通过空气飞沫传播。此外，病毒还可以通过被污染的物品，如食具、衣物等间接传播。犬瘟热的高传染性使得一旦疫情爆发，往往迅速蔓延至整个犬群，甚至整个地区。

(2)犬瘟热病毒的流行病学特点还体现在其季节性和周期性。通常情况下，犬瘟热病毒在寒冷季节，如冬季和春季，感染率较高。这可能与低温环境下病毒在环境中的存活时间延长有关。此外，犬瘟热病毒的流行周期也具有明显的规律性，一般每隔3-5年会出现一次大规模的疫情。例如，2014年至2015年，我国某地区爆发了一次犬瘟热疫情，感染犬只数千只，死亡数百只，给当地犬类养殖户带来了巨大的经济损失。这一周期性流行可能与犬瘟热病毒变异、宿主免疫状态以及环境因素等因素有关。

(3)犬瘟热病毒的流行病学特点还表现在其易感动物范围广。犬瘟热病毒不仅感染犬类，还可感染其他犬科动物，如狐狸、狼、貉等。其中，幼犬、老龄犬和未接种疫苗的犬只对犬瘟热病毒最为易感。幼犬由于免疫系统尚未完全成熟，感染后死亡率极高；老龄犬由于免疫力下降，感染后病情严重，死亡率也较高。此外，未接种疫苗的犬只缺乏特异性