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人肝前体细胞

1范围

本文件规定了人肝前体细胞制备的原材料和辅料、制备的一般要求、技术要求、检验方法、检验规则、标签、包装、储存及运输和废弃物处理要求。

本文件适用于人肝前体细胞的制备和检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

《中华人民共和国药典》（2020年版）

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19815离心机安全要求

GB/T26497电子天平YY/T0588流式细胞仪

JJF1665流式细胞仪校准规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1人肝前体细胞

由肝细胞在特殊条件下转化而得，可再次分化为肝细胞，在肝再生过程中起到重要作用的一类细胞。

3.2主细胞库

由细胞种子经培养至特定倍增水平或传代水平，并经一次制备获得并分装的同质和均一的悬液。

注：细胞种子是指已通过鉴定证明适用于生物制品生产或检测的，来源于人或动物的，由一个原始细胞群体发展成传代稳定的细胞群体，或经过克隆培养以及基因工程构建的均一细胞群体。

3.3工作细胞库

由主细胞库的细胞经培养至特定倍增水平或传代水平，并经一次制备获得的同质和均一的悬液。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

FBS：胎牛血清（FetalBovineSerum）ALB：白蛋白（Albumin）

AFP：甲胎蛋白（Alpha-Fetoprotein）

ASGR1：去唾液酸糖蛋白受体1（AsialoglycoproteinReceptor1）CD：分化簇（ClusterofDifferentiation）

CFSE：羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(CarboxyfluoresceinSuccinimidylEster)ELISA：酶联免疫吸附试验（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay）

FGF7：肝前体细胞生长因子7（FibroblastGrowthFactor7）HGF:肝细胞生长因子（HepatocyteGrowthFactor）

HLA-DR,DP,DQ：人白细胞抗原DR,DP,DQ（HumanLeukocyteAntigen-DR,DP,DQ）HNF4α：肝细胞核因子4α（HepatocyteNuclearFactor4Alpha）

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IL-2：白介素-2（Interleukin-2）

MMP1:基质金属蛋白酶-1（MatrixMetalloproteinase-1）MMP2:基质金属蛋白酶-2（MatrixMetalloproteinase-2）

PBMC：外周血单核细胞（PeripheralBloodMononuclearCells）PHA：植物血凝素（Phytohemagglutinin）

LAC：白细胞活化混合液（LeukocyteActivationCocktail）

Fix/PermKit：固定/通透化试剂盒（Fixation/PermeabilizationSolutionKit）RPMA：反相蛋白质微阵列技术（ReversePhaseProteinMicroarray）

TNF-α：肿瘤坏死因子-α（TumorNecrosisFactor-alpha）

5原材料和辅料

5.1起始原材料的获取应符合伦理和法律法规，起始原材料供者应签署书面的合法有效的知情同意书，并建立起始原材料数据库，保护供者隐私信息。

5.2应建立和执行供者评估及筛选方法，供者应至少筛查HBV、HCV、HIV、TP，检测结果应均为阴性,注：HBV为乙型肝炎病毒（HepatitisBVirus）的缩写，HCV为丙型肝炎病毒（HepatitisCVirus）的缩写，HIV

为人类免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiencyVirus）的缩写，TP为梅毒螺旋体（Treponemapallidum）的缩写。

5.3应排除有遗传性疾病的供者，并应对供者进行一般情况筛查。

5.4应建立和执行组织或细胞的采集、运输、交接与储存方法。

5.5细胞培养过程中使用的培养基及其他添加物等应建立质量标准，并按照质量标准进行控制。

5.6不宜使用动物血清或其他动物源成分，如必须使用，应确认无特定动物源性病毒感染。

5.7细胞冻存时使用的辅料，应建立质量标准，并按照质量标准进行控制。

6制备的一般要求

6.1人肝前体细胞培养所需的基础设施和环境条件，应符合GMP要求，满足