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《质粒不稳定性》课件.ppt

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质粒不稳定性

质粒简介遗传物质环状的双链DNA分子。独立于细菌染色体存在。可在细菌之间传递。

质粒的结构复制起点质粒复制起点是DNA复制的起始位点,决定了质粒的复制频率和拷贝数。抗生素抗性基因抗生素抗性基因赋予宿主细胞对特定抗生素的抵抗能力,便于质粒的筛选和分离。启动子启动子是RNA聚合酶结合的位点,控制下游基因的转录,影响蛋白质的表达水平。

质粒复制1起始复制从质粒的复制起点开始。2解旋DNA双螺旋解开,形成复制叉。3合成DNA聚合酶沿着模板链合成新的DNA链。4终止当复制到达复制起点时,复制过程结束。

质粒稳定性的重要性持续表达稳定性确保质粒在宿主细胞中持续复制和表达,以确保基因的稳定表达。研究可靠性稳定性是基因工程研究和生物技术应用的关键因素,确保实验结果的可靠性。药物生产稳定性对工业规模的生物制药生产至关重要,以确保药物的有效性和一致性。

质粒不稳定性的原因1复制控制异常质粒复制控制系统失衡,导致拷贝数不稳定。2DNA复制错误DNA复制过程中的错误,可能导致质粒序列改变或丢失。3重组事件质粒与宿主染色体或其他质粒之间发生重组,导致质粒结构改变或丢失。4选择压力变化培养条件改变,例如抗生素浓度变化,可能导致不含有质粒的细胞获得生长优势。

复制控制异常拷贝数失控质粒复制控制机制失效,导致质粒拷贝数过高或过低。复制起点突变质粒复制起点发生突变,影响复制效率和拷贝数。调控蛋白失活参与质粒复制控制的调控蛋白功能失常,影响复制效率。

DNA复制错误DNA复制过程中发生的碱基错配或插入缺失,可能导致质粒序列发生变异,影响其功能或稳定性。复制错误可能导致抗生素抗性基因失效或其他基因表达异常,降低质粒的实用价值。宿主细胞的DNA修复机制可以修复部分复制错误,但无法完全避免质粒的突变。

重组事件同源重组基于两个DNA序列之间同源性的交换,在复制和修复过程中起到重要作用。位点特异性重组由特定重组酶介导,在质粒整合、转座和基因工程中发挥作用。非同源重组发生在没有同源性的DNA序列之间,可能导致质粒结构改变,甚至丢失。

选择压力变化1环境变化生长环境的改变,如营养物质的缺乏或温度的波动,会影响质粒的稳定性。2抗生素压力当抗生素浓度降低或细菌对抗生素产生抗性时,质粒的稳定性可能会下降。3竞争压力当存在其他竞争性质粒或其他细菌时,质粒的稳定性可能会受到影响。

质粒丢失机制细胞分裂在细胞分裂过程中,质粒可能无法被分配到两个子细胞中,导致一个子细胞失去质粒。复制失误质粒复制过程中可能发生错误,导致质粒结构缺陷,降低其稳定性,增加丢失风险。降解质粒的DNA可能被宿主细胞的核酸酶降解,导致质粒丢失。

转录干扰抑制转录质粒DNA的转录可以被宿主细胞的转录因子或其他调节元件抑制,导致质粒基因表达降低。竞争性结合质粒DNA上的启动子序列可能与宿主细胞的基因组DNA上的启动子序列竞争性结合转录因子,导致质粒基因表达降低。

翻译障碍密码子错配质粒基因的密码子可能与宿主细胞的密码子偏好性不同,导致翻译效率降低。核糖体结合位点质粒基因的核糖体结合位点可能无法被宿主细胞的核糖体有效识别,导致翻译起始受阻。翻译终止信号质粒基因的翻译终止信号可能与宿主细胞的终止信号不同,导致翻译提前终止或异常延长。

蛋白质折叠问题错误折叠质粒编码的蛋白质可能错误折叠,影响其功能和稳定性。伴侣蛋白作用细胞内伴侣蛋白帮助蛋白质正确折叠,但质粒编码的蛋白质可能无法得到足够的支持。

细胞内环境变化pH值变化细胞内的pH值波动可能影响质粒的稳定性,尤其是对于对pH值敏感的质粒。温度变化温度升高或降低可能会影响质粒的复制和维持,导致质粒丢失。营养成分变化某些营养物质的缺乏或过量可能会抑制质粒的复制或表达,从而导致不稳定性。

异源质粒竞争多个质粒共存于一个细胞内,它们会争夺相同的资源,如复制起始位点、转录和翻译机制。如果一个质粒拥有更高的复制效率或更强的选择优势,它更有可能复制并维持自身,而其他质粒可能会被挤出。

质粒复制失衡复制起点数量复制起点数量的增加可能导致质粒过度复制,导致细胞生长受阻或死亡。复制速率变化复制速率的改变会影响质粒拷贝数,从而影响质粒的稳定性。复制控制基因突变复制控制基因的突变会改变复制速率和拷贝数,导致复制失衡。

质粒扩增性增加拷贝数升高某些情况下,质粒复制控制机制可能失调,导致质粒拷贝数显著增加。细胞负担过高的质粒拷贝数会消耗宿主细胞资源,导致细胞生长缓慢甚至死亡。遗传不稳定性大量质粒DNA的存在可能会增加质粒重组和突变的风险,导致基因组不稳定。

质粒扩增性降低1复制起点突变质粒复制起点突变可能会导致复制效率降低,进而降低质粒扩增性。2复制酶活性降低复制酶活性降低会导致复制速度减慢,进而影响质粒扩增。3质粒大小增加质粒大小增加会增加复制时间和资源消

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