细胞培养-正常组织细胞的培养.pptVIP

几种细胞培养方法举例脐静脉血管内皮细胞取健康产妇分娩正常新生儿后6小时以内的脐带，立即浸泡在含青霉素、链霉素的D-Hanks液中，洗去外部血污。在超静工作台上剪去有钳子夹痕、扭曲、凝血块、穿孔段后分离出10-15厘米一段。几种细胞培养方法举例脐静脉血管内皮细胞用注射器吸取Hanks液，充分清洗脐静脉，用血管钳夹紧脐带一端，从另一端向脐静脉管腔内缓慢注入0.1％I型胶原酶8-10ml，静脉充盈后，用另一只血管钳夹住防胶原酶返流。置入37℃培养箱内消化10分钟。几种细胞培养方法举例以1～5X105个细胞的密度接种在适量DMEM或FAD培养液中，37℃培养1-3天，细胞贴壁后，冲洗未贴壁细胞。传代培养：0.05%-0.1%的EDTA孵育10-30min，细胞变圆后，在用0.1%的胰蛋白酶和0.05%EDTA消化，吸管吹打是细胞完全脱壁。几种细胞培养方法举例脐静脉血管内皮细胞松开一端血管钳，将含有内皮细胞的消化液收集到离心管中，然后注入含10％胎牛血清的RPMI1640培基终止消化并冲洗血管，以便获取更多的内皮细胞。几种细胞培养方法举例脐静脉血管内皮细胞将冲洗液一并注入离心管，以1000rpm离心l0分钟，弃上清液，加RPMI1640培养液，接种于50ml一次性塑料培养瓶中，置37℃培养箱内，在5％C0224小时后换液一次，除去红细胞和未贴壁的细胞继续培养，隔两天换液一次。几种细胞培养方法举例脐静脉血管内皮细胞几种细胞培养方法举例脐静脉血管内皮细胞几种细胞培养方法举例人滑膜细胞将手术取下的新鲜的滑膜组织置于无菌的平皿中，剔除脂肪组织，用含青、链霉素的D-Hanks洗涤两次，用眼科剪将滑膜组织充分剪碎，吸入螺口管中，1200rpm/min，离心10分钟。几种细胞培养方法举例人滑膜细胞离心后，弃上清，加入一倍体积的0.4％II型胶原酶，置于37℃5％CO2培养箱中消化60分钟（每15分钟吹打一次）。初次消化后，离心弃上清，再加入一倍体积的0.25％胰蛋白酶继续消化30分钟。最后加入含15％血清的RPMI1640培养液终止消化。几种细胞培养方法举例人滑膜细胞消化后的细胞悬液经200目的筛网过滤并离心洗涤两次，再用含10％小牛血清的RPMI1640培养液重悬细胞，接种于培养瓶中，置于37℃5％CO2培养箱中培养24小时，轻轻去除仍悬浮的细胞，继续培养，每3天换液一次,约10天左右可长满瓶底。人滑膜细胞细胞长满培养瓶后即可进行传代培养，用0.05％胰蛋白酶-0.02％EDTA消化后按几种细胞培养方法举例几种细胞培养方法举例几种细胞培养方法举例人滑膜细胞几种细胞培养方法举例人滑膜细胞正常组织细胞的培养主要内容培养细胞的取材组织材料的分离原代细胞培养几种细胞培养方法举例建立细胞系主要内容培养细胞的取材组织材料的分离原代细胞培养几种细胞培养方法举例建立细胞系培养细胞的取材取材的基本要求新鲜标本严格无菌操作尽可能减少对细胞的机械损伤尽量去除血液、剔除脂肪、结缔组织等同时保留组织学标本（光镜和电镜）培养细胞的取材基本器材和用品手术器械青霉素小瓶（含培基或缓冲液）小烧杯培养皿皮肤和粘膜的取材内脏和实体瘤的取材血细胞取材骨髓、羊水、胸腹水内细胞的取材其他组织的取材培养细胞的取材培养细胞的取材人类角质形成细胞皮肤和粘膜的取材 上皮细胞的来源方法似外科断层皮片手术面积一般2-3mm2，取材尽量薄可用高浓度抗生素漂洗内脏和实体瘤的取材常用的细胞培养材料内脏除肠道外多无菌实体瘤因破溃、感染可能伴有细菌培养细胞的取材培养细胞的取材血细胞取材染色体分析淋巴细胞体外激活，进行免疫治疗骨髓、羊水、胸腹水内细胞的取材无需特别处理，离心后直接接种培养细胞的取材组织材料的分离原代细胞培养几种细胞培养方法举例建立细胞系主要内容组织材料的分离机械法化学法组织材料的分离细胞悬液的分离低速离心500-1000rpm×10min组织材料的分离机械分散法机械分散法注射器针芯挤压不锈钢滤网剪切分离法组织块的分离组织材料的分离组织块的分离机械分散法组织材料的分离组织块的分离消化分离法胰蛋白酶适合胚胎、上皮、肝、肾等组织消化。pH、温度、酶蛋白浓度、组织块大小影响消化效果。浓度为0.1％～0.5％，pH8.0.与EDTA混合使用。组织块的分离消化分离法胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四种类型。根据分离组织类型选择相应型的胶原酶。对胶原有较强的消化作用，适合消化纤维性组织、上皮和癌组织。浓度为0.03～0.3％。组织材