细胞免疫荧光技术.ppt

细胞免疫荧光技术

实验目的

掌握免疫荧光技术的基本原理

熟悉细胞免疫荧光技术的方法

了解在免疫细胞化学技术中如何获得好的实验结果

实验原理

原位检测

抗原抗体特异反应

间接法

间接荧光抗体染色法示意图

Hela细胞

Vinculin

实验用品

试剂：

固定液：4%PFA

细胞通透：0.2%TritonX

封闭试剂：10%正常山羊血清

一抗：小鼠源抗Vinculin单克隆抗体

二抗:AlexaFluor555标记的山羊抗小鼠IgG

DAPI（4’,6-二脒基-2-苯基吲哚）

PBS洗涤缓冲液：PH7.4

材料：

Hela细胞

细胞培养皿

仪器：

荧光显微镜

实验步骤

一，细胞制备和细胞固定

实验步骤

二，细胞免疫荧光ICC染色

0.2%

TritonX

处理5min

封闭

室温30min

4℃过夜

37℃1-2小时

37℃5-10min

荧光显微镜观察

实验结果

三，观察

humanHeLacells

实验中应注意的问题

细胞不要铺的过密:60-70%

防止细胞污染

固定时间不要太长,一般10-30min

TrionX处理时间不宜过长，膜蛋白可不必处理

选择合适的封闭液

二抗孵育后,一定要洗干净

必要时用恒温摇床摇洗

1.免疫荧光技术

2.免疫酶技术

3.免疫亲和技术

4.胶体金技术

标记物

使抗体或抗原

抗体复合物在

各种显微镜下

可见的物质

免疫细胞化学技术

免疫细胞化学技术注意事项

选择合适的方法

材料要留好

选择抗体

选择标记酶

封闭液的选择

设定对照实验

思考题

检测Hela细胞中蛋白A定位情况，思考应选择什么方法，

用什么仪器观察？

疑难解答

一，缺乏染色

二，高背景

三，细胞/组织的形态被破坏

四，染色不正确

1、字体安装与设置

如果您对PPT模板中的字体风格不满意，可进行批量替换，一次性更改各页面字体。

在“开始”选项卡中，点击“替换”按钮右侧箭头，选择“替换字体”。（如下图）

在图“替换”下拉列表中选择要更改字体。（如下图）

在“替换为”下拉列表中选择替换字体。

点击“替换”按钮，完成。

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2、替换模板中的图片

模板中的图片展示页面，您可以根据需要替换这些图片，下面介绍两种替换方法。

方法一：更改图片

选中模版中的图片（有些图片与其他对象进行了组合，选择时一定要选中图片本身，而不是组合）。

单击鼠标右键，选择“更改图片”，选择要替换的图片。（如下图）

注意：

为防止替换图片发生变形，请使用与原图长宽比例相同的图片。

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