基于基因工程多肽和DOX的可注射水凝胶用于肿瘤的联合治疗.pdf

华中科技大学硕士学位论文

摘要

癌症是威胁人类生命健康的主要疾病之一，基因功能异常和基因表达模式改变

是癌症的主要特征。现今，化疗是临床治疗癌症的常见方式，但是单一的治疗方式目

前很难完全根治肿瘤。因此，将化疗和其它治疗手段有效结合往往能增强治疗效果。

化学动力学治疗是利用金属离子和细胞内源性的过氧化氢进行芬顿或类芬顿反应产

生活性氧诱导细胞死亡的抗肿瘤策略。金属离子多采用过渡金属元素，例如Fe3+、

Cu2+、Mn4+等。化学动力学治疗中的金属离子除了参与芬顿反应外还能调控肿瘤微环

境中的谷胱甘肽，避免谷胱甘肽清除产生的羟基自由基和逆转化疗药物的耐药性。将

化疗和化学动力学治疗集合到同一治疗体系上是联合治疗面临的一个巨大的挑战。

原位可注射性水凝胶由于其创伤性小、操作简便、药物的载药量大等优点，在生物医

学领域备受关注。相对于合成高分子和天然高分子材料，基因工程多肽制备的可注射

性水凝胶具有成分单一、生物相容性好、结构灵活可控等优点。基于此，本论文采用

基因工程多肽PC10ARGD制备水凝胶负载Cu2+和化疗药物阿霉素(DOX)构建多功

能可注射性水凝胶用于4T1肿瘤的化疗和化学动力学的联合治疗。主要工作如下：

(1)制备了一种基于Cu2+和脱除盐酸的疏水性DOX形成的配合物以及基因工程

多肽PC10ARGD的PC10ARGD/CD(C：Cu2+，D：脱除盐酸DOX)可注射水凝胶用于

4T1肿瘤的化疗和化学动力学的联合治疗。首先，Cu2+和脱除盐酸的DOX配位制备

纳米颗粒CD。相比于游离的DOX，CD的紫外-可见吸收峰发生了一定程度的红移,

加入GSH导致CD纳米结构解离。PC10ARGD/CD水凝胶呈现酸响应释放特性，pH

5.6缓冲溶液孵育10h，PC10ARGD/CD水凝胶中的Cu2+释放量为24.6%。通过MB

和TNB实验结果表明，PCARGD/CD水凝胶在HO存在的条件下持续产生·OH和

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消耗GSH。体外的MTT实验结果表明PC10ARGD水凝胶具有良好的生物相容性以

及PC10ARGD/CD水凝胶具有良好的细胞活性抑制效果。活体的抗肿瘤治疗结果表

明，相比较于单一的化学动力学或化疗，PC10ARGD/CD治疗后肿瘤生长抑制最为明

显，可以实现化学动力学和化疗的联合治疗。最后，治疗过程中小鼠的体重变化、主

要器官的HE染色及血液生化结果表明PC10ARGD/CD水凝胶没有明显毒副作用。

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(2)制备了一种基于Cu2+、亲水性盐酸DOX和PC10ARGD的可注射性水凝胶

PC10ARGD/Cu2+/DOX。首先，Cu2+和PC10ARGD多肽上的组氨酸配位，然后将水溶

性化疗药物DOX包埋至PC10ARGD/Cu2+水凝胶中制备PC10ARGD/Cu2+/DOX水凝

胶。结果表明，低浓度下的PC10ARGD/Cu2+/DOX呈现纳米水凝胶形态，透射电镜结

果表明，0.05%(w/v)PC10ARGD/Cu2+/DOX纳米水凝胶尺寸为60nm；扫描电镜结果

表明，PC10ARGD/Cu2+/DOX水凝胶呈现疏松多孔形貌。体外的ROS产生结果表明,

在HO存在的条件下PCARGD/Cu2+/DOX水凝胶能持续产生·OH。体外MTT结果

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表明，在细胞水平上PC10ARGD/Cu2+/DOX水凝胶具有良好的抑制细胞活性的能力；

流式细胞术结果进一步证实了PC10ARGD/Cu2+/DOX水凝胶的抗肿瘤效果。相对于游

离的DOX，可注射性PC10ARGD/Cu2+/DOX水凝胶在肿瘤部位滞留时间更长。活体

实验结果表明，相对于对照组，PC10ARGD/Cu2+/DOX水凝胶治疗的小鼠肿瘤体积明

显得到了抑制。通过监测小鼠体重和血液分析结果表明，PC10ARGD/Cu2+/DOX水凝

胶具有良好的生物安全性。

综上所述，本论文采用基因工