DB32T 3683-2019 猪链球菌9型PCR检测技术规程.pdfVIP

ICS11.220

B41DB32

江苏省地方标准

DB32/T3683—2019

猪链球菌9型PCR检测技术规程

TechnicalregulationforPCRdetectingStreptococcussuisSerotype9

2019-12-03发布2019-12-25实施

江苏省市场监督管理局发布

DB32/T3683—2019

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。

本标准由江苏省农业科学院提出并归口。

本标准起草单位：江苏省农业科学院。

本标准主要起草人：倪艳秀、何孔旺、周俊明、祝昊丹、吕立新、俞正玉、王丹丹、张雪寒、温立

斌、李彬。

I

DB32/T3683—2019

猪链球菌9型PCR检测技术规程

1范围

本标准规定了猪链球菌9型PCR检测技术所用的仪器设备和主要试剂、引物、方法步骤、结果判定、

废弃物处理和防止污染的措施等要求。

本标准适用于猪链球菌9型的PCR检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

《病死及病害动物无害化处理技术规范》（农医发〔2017〕25号）

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

猪链球菌9型Streptococcussuisserotype9

属于链球菌属的一种细菌，根据其荚膜多糖抗原的差异，可分为1-31、33及1/2共33个血清型。猪

链球菌9型是猪链球菌的一个血清型，不仅对猪致病性很强，而且可以感染特定的人群，是一种人兽共

患病病原菌。

4仪器设备和主要试剂

4.1仪器设备

高速离心机、水浴锅、PCR仪、核酸电泳仪、凝胶成像系统。

4.2主要试剂

生理盐水、超纯水、蛋白酶K、2×PCRMix、琼脂糖（电泳级）、DNA分子量标准（DL2000Marker）。

5引物

5.1上游引物：5′-GGCTACATATAATGGAAGCCC-3′。

5.2下游引物：5′-CCGAAGTATCTGGGCTACTG-3′。

6方法步骤

6.1样品处理

6.1.1病料样品处理

1

DB32/T3683—2019

采用差速离心法，取约5g病料（肝或肺或脑组织），剪碎研磨，用5mL生理盐水混悬，先2000

r/min离心2min，去除大组织块，取上清液，后10000r/min离心5min，弃上清液，沉淀以200µL超

纯水重悬，备用。

6.1.2待检培养物样品处理

取待检液体培养物（纯培养物或混合培养物）1mL10000r/min离心5min，弃上清，沉淀以200µL

超纯水重悬，备用。阴性对照：THB培养基。阳性对照：猪链球菌9型标准菌株（22083）的THB培

养物。阴性、阳性对照也同样处理，对每个样品进行编号标记。

6.2DNA提取

取6.1