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纯化水微生物限度检查法验证方案

1.验证目的：

纯化水微生物限度试验采用薄膜过滤法检查。确认该方法适合于纯化水细菌、霉菌

及酵母菌数测定。

2.职责

2.1验证委员会：负责验证方案及报告的批准并组织协调验证工作并签发验证证书。

2.2.验证组长

2.2.1.负责验证方案的起草

2.2.2.负责验证的协调工作，以保证本验证方案的顺利实施。

2.2.3.负责验证报告的审批。

2.2.4.负责发放验证证书。

2.2.5.负责再验证周期的确认。

2．3.质保部

2．3.1.负责验证方案审核

2．3.2.负责取样及对样品的检验

2．3.3.负责收集验证记录，并加以分析后，起草验证报告。

2．3.4.负责验证数据及结果的审核

3.参照标准：

2005版中国药典二部附录XIJ微生物限度检查法。

4.验证项目：

细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证。

5.合格标准：

试验组的菌回收率和稀释剂对照组的菌回收率均不得低于70%。

6.试验材料：

6.1.被验证产品：

品名纯化水取样点总出水口洗瓶用水洗涤消毒

检验量5ml

6.2.仪器设备：

6.2.1.SYQ/ZDX-35B1型自动座式压力蒸汽灭菌器

6.2.2.YOKO-ZX紫外分析暗箱

6.2.3.SW-EJ-2FB双人净化工作台

6.2.4.101-2A电热鼓风干燥箱

6.2.5.SPX-250B型生化培养箱(23～28℃)

6.2.6.PHW-200S恒温培养箱(35～37℃)

6.2.7.CR-50×50×65数显隔水式恒温培养箱(30～35℃)

6.3.稀释剂：0.9%无菌氯化钠溶液

6.4.验证用培养基

名称生产厂家批号

营养琼脂培养基

营养肉汤培养基

玫瑰红钠琼脂培养基

改良马丁培养基

改良马丁琼脂培养基

6.5.验证用菌株：(第3代)

验证菌株培养基培养温度培养时间（小时）

大肠埃希菌营养肉汤30—35℃

金黄色葡萄球菌营养肉汤30—35℃

枯草芽孢杆菌营养肉汤30—35℃

白色念珠菌改良马丁培养基23—28℃

黑曲霉菌改良马丁琼脂培养基23—28℃

7.菌液制备

7.1.取经35～36℃培养18~24小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、与枯草芽孢杆菌营

-6-7

养肉汤新鲜培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10~10约为

50~100cfu∕ml的菌悬液备用。

7.2.取经24～25℃培养24~48小时的白色念珠菌改良马丁液体培养物1ml加入到9ml0.9%

-5

无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10约为50~100cfu∕ml的菌悬液备用。

7.3.取经24～25℃培养一周的黑曲霉菌斜面培养物，加0.9%无菌氯化钠溶液10ml将孢子

洗脱，然后吸出孢子悬液，用垫有脱脂棉的漏斗（湿热灭菌）过滤，除去菌丝，收集孢

子悬液至另一无菌试管内作为菌原液，取此孢子悬液0.1ml加到9.9ml0.9%无菌氯化钠溶

-5

液中，稀释至10约为50~100cfu∕ml的菌悬液备用。

8.菌液计数：（每种菌液接种2个平皿）

大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌分别划线接种至营养琼脂培养基，置

35～36℃培养二天；白色念珠菌、黑曲霉分别划线接种至玫瑰红钠琼脂培养基，置24～

25℃培养三天。

菌落计数结果（2