生物化学 第四节 酶促反应动力学.ppt

直接作图法误差比较大，因为即使是用很大的底物浓度，也只能得到趋近于Vmax的反应速度，而达不到真正的Vmax，因此测不到准确的Km值。 双倒数作图法因为方便而应用最广，但缺点是实验点过分集中于直线的左端，作图不易准确。 Hanes作图法数据点在坐标图中分布比较平坦，但缺点是因为纵坐标包含两个变数，统计处理困难，且增加了误差。pH对酶促反应速度的影响是复杂的。影响：i.酶的稳定性； ii.酶活性中心重要基团的解离状态及底物的解离状态。一种酶只在某一pH范围内表现出最高的催化活性，偏离此值则反应速度下降，通常称此pH值为某酶的最适pH。典型的最适pH曲线是钟罩形曲线。 二、pH对酶促反应速度的影响一般来说大多数酶的最适pH在5-8之间，多数植物和微生物来源的酶最适pH在4.5-6.5左右，动物酶的最适pH在6.5-8.0左右，也有例外，如胃蛋白酶最适pH为1.5-2.5，精氨酸酶为9.8-10.0。最适pH(optimumpH)三、温度对酶促反应速度的影响一方面，温度升高,酶促反应速度加快。另一方面,温度升高,酶的空间结构将发生变化引起酶变性，导致酶活性降低甚至丧失。因此大多数酶都有一个显示最大活力的温度，称为该酶的最适温度。在最适温度条件下,酶促反应速度最大。最适温度与底物浓度，介质pH，离子强度，保温时间等因素有关。四、酶浓度的影响在一定条件下，酶的浓度与反应初速度成正比。因为酶催化反应时，酶先要与底物形成中间物，当底物浓度大大超过酶浓度时，反应达到最大速度，这时增加酶浓度可增加反应速度，反应速度与酶浓度成正比。五、激活剂的影响 1.激活剂(activator) 凡能提高酶活性，加速酶促反应进行的物质都称为该酶的激活剂。2.激活机理(1)与酶分子中的氨基酸侧链基团结合，稳定酶催化所需的空间结构；(2)作为底物(或辅酶)与酶蛋白之间联系的桥梁；(3)作为辅酶(或辅基)的一个组成部分协助酶的催化作用。3.激活剂种类(按分子量大小分) (1)无机离子激活剂 阴离子如Cl-、Br-、I-、CN-、NO3-、PO43-等；金属离子如Na+、K+、Ca2+、Zn2+、Co2+、Cr3+、Fe2+等。 一般认为金属离子的激活作用，主要是由于金属离子在底物和酶之间起了桥梁作用，形成E-金属离子-S三元复合物，从而更有利于底物和酶的活性中心结合。在作为激活剂的金属离子中，Mg2+尤为突出，几乎参与体内所有的代谢反应。(2)一些小分子的有机化合物 如抗坏血酸、半胱氨酸、还原型谷胱甘肽等，对于某些含巯基的酶具有激活作用。(3)一些能除去抑制剂的物质如EDTA，它是金属螯合剂，能除去重金属杂质，从而解除重金属对酶的抑制作用。(4)生物大分子激活剂 一些蛋白激酶对于某些酶的激活，在生物体代谢活动中起重要的作用。Attentionplease 激活剂的作用是相对的，一种酶的激活剂对另一种酶来说，也可能是一种抑制剂。不同浓度的激活剂对酶活性的影响也不同。六、抑制剂的影响(一)基本概念的区分 1.失活作用 2.降解作用 3.抑制作用失活作用凡可使酶蛋白变性而引起酶活性丧失的作用称为失活作用。蛋白变性剂可引起酶蛋白变性而使酶丧失活性，变性剂对酶的作用没有选择性。降解作用 使酶蛋白变成小肽或氨基酸的作用称为降解作用。抑制作用某些物质并不使酶失活，而只是与酶分子中某些必需基团(主要是活性中心上的一些基团)结合，使酶活性中心的结构和性质发生改变，从而引起酶活性下降或丧失，这种作用称为抑制作用。能引起这种抑制作用的物质称为该酶的抑制剂(inhibitor)。很多药物是酶的抑制剂，通过对病原体内某些酶的抑制作用或改变体内某些酶的活性而发挥其治疗功效，了解酶的抑制作用是阐明药物作用机制和设计研究新药的重要途径。 根据抑制剂与酶的作用方式及抑制作用是否可逆，可将抑制作用分为两大类： 1.不可逆抑制作用(irreversibleinhibition)2.可逆抑制作用(reversibleinhibition)(二)抑制作用的类型 有些抑制剂能与酶分子上的某些基团以共价形式结合，导致酶的活性丧失，而且不能用透析、超滤等方法除去抑制剂而使酶的活性恢复。这种作用就称为不可逆抑制作用。 按照不可逆抑制作用的选择性不同，又可分为专一性的不可逆抑制和非专一性的不可逆抑制两类。1、不可逆抑制非专一性不可逆抑制剂抑制剂与酶分子中一类或几类基团作用，不论是必须基团与否