《细胞培养技术》课件.ppt

细胞培养技术：原理与应用欢迎来到细胞培养技术课程！本课程将带您深入了解细胞培养的原理、应用和操作技巧，为您在生命科学研究中提供坚实的理论基础和实践指导。

课程大纲与学习目标课程大纲1.细胞培养技术概述2.实验室安全与无菌操作3.细胞培养环境与培养基4.细胞传代与计数5.细胞冻存与复苏6.细胞污染与处理7.细胞形态观察与生长曲线8.细胞同步化与克隆技术9.细胞转染技术10.细胞培养质量控制学习目标1.掌握细胞培养的基本原理和技术操作2.了解细胞培养在生命科学研究中的应用3.培养良好的实验室安全意识和无菌操作习惯4.学习如何解决常见的细胞培养问题5.具备独立进行细胞培养实验的能力

细胞培养的历史发展119世纪末科学家首次尝试在体外培养动物细胞220世纪初细胞培养技术得到初步发展，用于研究细胞生长和分化320世纪中叶抗生素的发现，极大降低了细胞培养的污染率420世纪后半叶细胞培养技术广泛应用于生物学、医学、药学等领域521世纪细胞培养技术不断革新，应用领域不断拓展

细胞培养的重要性和应用领域1基础研究研究细胞生长、分化、衰老、凋亡等生命过程2药物研发药物筛选、毒性评价、药物代谢研究3疾病研究研究疾病机制、筛选药物、开发治疗方法4生物工程生产疫苗、抗体、激素等生物制品5再生医学组织器官修复、移植、克隆技术

实验室安全规范防火安全熟悉实验室的消防设备和逃生路线化学品安全正确使用和存放化学品，佩戴防护用品生物安全严格遵守无菌操作规范，防止交叉污染意外事故处理熟悉紧急救护措施，及时报告意外事件

无菌操作基本原则环境消毒定期消毒工作区域，使用紫外灯杀菌物品灭菌使用高压灭菌器对培养皿、移液管等进行灭菌操作规范戴手套、帽子、口罩，保持操作区域清洁火焰灼烧使用酒精灯火焰灼烧接种环、瓶口等无菌操作台使用无菌操作台进行细胞操作

生物安全柜的使用方法预操作准备清洁工作台面，打开紫外灯照射30分钟启动安全柜开启风机，将安全柜内部空气置换无菌操作按照无菌操作规范进行细胞操作结束操作关闭风机，用75%酒精擦拭工作台面，打开紫外灯照射30分钟

细胞培养实验室设备介绍培养箱提供细胞生长的适宜温度、湿度和二氧化碳浓度显微镜观察细胞形态、生长状况和污染情况离心机分离细胞、收集培养基、制备细胞悬液高压灭菌器对培养皿、移液管等进行灭菌处理超净工作台提供无菌操作环境，防止细胞污染

显微镜的使用和保养使用步骤1.打开光源，调节光强2.将载玻片放在载物台上，使用压片夹固定3.旋转物镜转换器，选择合适的物镜4.调节粗准焦螺旋，使物镜与载玻片接近5.调节细准焦螺旋，使视野清晰保养方法1.使用后用擦镜纸清洁镜片2.避免阳光直射，防止镜片老化3.定期检查机械部分，确保其灵活度4.存放于干燥、通风的地方

细胞培养基本器材1培养皿用于细胞培养的平底容器2培养瓶用于细胞培养的圆底或三角形容器3移液管用于吸取和转移液体4接种环用于接种细胞的金属环5血球计数板用于计数细胞数量

培养基的种类123基础培养基含有基本营养成分，例如DMEM、RPMI1640完全培养基基础培养基+血清+其他添加剂无血清培养基不含血清，使用替代物补充营养

基础培养基的组成氨基酸为细胞提供合成蛋白质的原料维生素参与细胞代谢和酶活性调节无机盐维持细胞内渗透压和pH值稳定葡萄糖为细胞提供能量来源其他成分例如酚红指示剂、抗生素等

血清的作用与类型血清的作用1.提供细胞生长所需的营养成分，例如蛋白质、脂类、维生素等2.促进细胞贴壁和生长3.中和培养基中的有毒物质4.提供激素和生长因子血清的类型1.牛血清2.马血清3.小牛血清4.胎牛血清

无血清培养基的应用减少批次间差异无血清培养基成分更稳定，可减少批次间差异降低成本无血清培养基比含有血清的培养基成本更低提高安全性无血清培养基可以减少病毒、支原体等污染的风险更精确的控制可以更精确地控制培养基的成分和浓度

培养基的配制方法溶解固体成分将基础培养基的固体成分溶解在水中，加热至完全溶解添加液体成分加入血清、抗生素等液体成分，混匀过滤除菌使用0.22μm的滤膜过滤，去除细菌和真菌分装保存将过滤后的培养基分装到无菌容器中，保存于4℃冰箱

培养基的保存要求14℃保存基础培养基和完全培养基应在4℃冰箱保存2避光保存培养基应避光保存，防止光照破坏成分3定期更换定期更换培养基，避免长期储存导致成分降解

细胞培养环境要求温度大多数细胞培养的最佳温度为37℃湿度细胞培养环境应保持较高的湿度，以防止培养基蒸发二氧化碳浓度培养箱中二氧化碳浓度一般保持在5%左右无菌环境细胞培养环境应保持无菌，防止污染

二氧化碳培养箱的使用预热培养箱提前开启培养箱，使温度达到设定值调节参数设定温度、湿度和二氧化碳浓度放入培养皿将培养皿放入培养箱内，确保培养基不被