菊花组织培养.ppt

常用植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素生长素、细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈加强的趋势激素的使用顺序、使用的量及比例影响植物细胞的发育方向3、植物激素的影响第25页，共59页，星期日，2025年，2月5日生长素类：2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）等。细胞分裂素类：激动素（KT）、6－苄基嘌呤（6－BA）、玉米素（ZT）等。赤霉素类：赤霉酸（GA3）等作用：2，4－D有利于愈伤组织的生长；IAA、NAA、IBA有利于器官分化。作用：促进细胞的分裂与分化，其中KT能明显促进芽的分化而抑制根的形成。作用：促进不定芽和幼株伸长。第26页，共59页，星期日，2025年，2月5日使用顺序实验结果先使用生长素，后使用细胞分裂素有利于细胞分裂，但不利分化先使用细胞分裂素后使用生长素细胞既分裂、也分化同时使用分化频率高使用比例实验结果生长素细胞分裂素生长素细胞分裂素生长素细胞分裂素＝有利于根的分化有利于芽的分化，抑制根的分化促进愈伤组织生长激素的使用顺序、使用量及比例影响植物细胞的发育方向：第27页，共59页，星期日，2025年，2月5日植物组织培养过程离体组织或细胞植物体脱分化细胞分裂素≈生长素愈伤组织芽根细胞分裂素生长素细胞分裂素生长素再分化植物细胞培养不需要光需要光需光否abABC补充下图（注：a、b过程，A、B、C为激素使用比例）a过程分裂方式（）b过程分裂方式（）有丝分裂有丝分裂第28页，共59页，星期日，2025年，2月5日思考：以下培养基出现的现象反应了什么问题？生长素/细胞分裂素高利于根的形成适中利于愈伤组织的形成第29页，共59页，星期日，2025年，2月5日供参考的配方1、诱导菊花愈伤组织：在MS培养基中加入BA和NAA，质量浓度均为0.5mg／Ｌ２、诱导菊花从芽：在MS培养基中加入BA和NAA，质量浓度分别为2---3mg／Ｌ和0.02—0.03mg／Ｌ3、诱导菊花生根：在MS培养基各成分用量减半，并添加入NAA或IAA，质量浓度均为0.1mg／Ｌ第30页，共59页，星期日，2025年，2月5日4．温度、光照、pH的影响光照：菊花每日用日光灯照射12h。温度：大多数植物组织培养控制在23～27℃，低于15℃时植物组织会表现生长停止；高于35℃时对植物生长不利。菊花的组织培养控制在18～22℃。pH：不同植物对培养基最适pH的要求不同，大多数控制在5～6.5。菊花的组织培养控制在5.8左右。第31页，共59页，星期日，2025年，2月5日制备MS固体培养基外植体消毒接种培养栽培四、实验操作移栽冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞—无菌水冲洗至少三次之上配制各种母液配制培养基灭菌第32页，共59页，星期日，2025年，2月5日（一）制备MS固体培养基MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4℃保存配制好的培养基母液来制备1、配制各种母液①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量第33页，共59页，星期日，2025年，2月5日2、配制培养基分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml①（）②（）③（）由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素3、灭菌分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌配制培养液调PH培养基的分装第34页，共59页，星期日，2025年，2月5日在植物组织培养的过程中，为什么要进行一系列的消毒、灭菌，并且要求无菌操作？第35页，共59页，星期日，2025年，2月5日1、植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对培养条件的要求较高：2、用于植物组织培养的培养基同样适合于某些微生物的生长,微生物产生的代谢废物会毒害培养的对象；培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃；因此要进行严格的无菌操作。无菌操作的原因？第36页，共59页，星期日，2025年，2月5日1、选材：（二）外