超氧化歧化酶研究进展.ppt

三、超氧化物歧化酶的活力测定和生理功能第30页，共59页，星期日，2025年，2月5日（一）、SOD的活力测定SOD活性在糖尿病和慢性肾功能不全与正常者间有显著差异；吸烟者红细胞SOD含量均较非吸烟者低.可见，适宜的SOD活力测定方法具有重要的现实意义。第31页，共59页，星期日，2025年，2月5日1、直接法脉冲辐射分析法，截流光谱分析法，极谱氧电极法和极谱法，可直接获得SOD催化反应的动力学信息，测定反应过程中SOD浓度的变化。因受试剂和仪器的限制，此类方法一般难于在实验室推广。第32页，共59页，星期日，2025年，2月5日2、间接法由于SOD的作用底物是O2ˉ，它的存在寿命很短，而上述直接法又不能得到普遍推广，因此一般常用间接的活力测定方法。此类方法有经典的邻苯三酚自氧化法，改良的邻苯三酚自氧化法，四氮唑蓝法，肾上腺素自氧化法、联二茴香胺法以及黄嘌呤氧化酶法，化学发光免疫法等。第33页，共59页，星期日，2025年，2月5日2、间接法原理是：有一产生O2-的系统，使O2-再产生一个便于检测的反应，通过监测SOD对这个反应的抑制程度，间接测定SOD活力。O2-+羟胺→亚硝酸盐+显色剂→紫红色2O2-→H2O2(SOD存在时)第34页，共59页，星期日，2025年，2月5日（二）、SOD的生理功能A.SOD是特殊的氧自由基清除剂B.明显的防晒效果，可有效防止皮肤受电离损伤；C.有效防止皮肤衰老，祛斑，抗皱，起抗氧化酶的作用。D.明显的抗炎作用，对皮肤病有一定的疗效。第35页，共59页，星期日，2025年，2月5日四、超氧化物歧化酶的研究动态、开发应用及存在的问题第36页，共59页，星期日，2025年，2月5日（一）、SOD的研究动态1、结构性能改造：①SOD酶半衰期短，室温下通常只有6—10分钟（min）；②分子量约32000道尔顿，不易透过细胞膜；③如果口服，易受蛋白酶水解而失去活力；④每人身体接受外源性SOD的差异。这些问题往往主要通过SOD的化学修饰来解决。第37页，共59页，星期日，2025年，2月5日SOD化学修饰的方法①对SOD的氨基酸残基进行化学修饰,主要是对非活性部位进行修饰,目的是提高其稳定性同时保留较高的生物活性②用水溶性大分子(如聚乙二醇、聚蔗糖、右旋糖酐和聚烯属烃基氧化物等)对SOD进行共价修饰以提高酶学特性③对SOD进行酶切改造,降低相对分子质量、减小抗原性。研究表明:化学修饰后SOD基本上保持了天然酶的活性,在耐热、耐酸碱和抗胃蛋白酶分解等方面均有很大提高。第38页，共59页，星期日，2025年，2月5日2、SOD模拟研究——活性中心模拟谢英等人合成了以二肽为配体的铜2(N2正十二碳酰双甘肽)配合物,这是一个带功能基的长链铜(Ⅱ)氨基酸配合物,同时用脉冲辐解法测定了其SOD活性,较好地模拟SOD毛宗万等人研究了具有Cu/Zn-SOD酶活性中心类似结构的模型化合物,结果表明,咪唑桥N原子沿四方锥配位底面位置与Cu(Ⅱ)配位的模拟物活性大大高于咪唑桥N原子沿四方锥轴向与Cu(Ⅱ)配位的模拟物-----SOD模拟物具有相对分子质量小、稳定性高、在体内半衰期长及脂溶性好的优点第39页，共59页，星期日，2025年，2月5日(二)、SOD的应用1、应用研究—SOD与顺铂的肾毒性Cis-[Pt(NH3)2C12]十H2O→Cis-[Pt(NH3)2(H2O)2]2+十2C1-第40页，共59页，星期日，2025年，2月5日氧化应激在顺铂所致肾毒性中的作用第41页，共59页，星期日，2025年，2月5日(二)、SOD的应用1、SOD在临床上的应用当机体超氧阴离子自由基产生过多或SOD浓度偏低时，过量的超氧阴离子就会引起疾病，补充外源性SOD可有效地予以防治。作为第一个以超氧阴离子自由基为其作用底物的酶被发现以来，已充分证明了其在防治与超氧自由基有关的疾病的作用是有效的。第42页，共59页，星期日，2025年，2月5日由于SOD是生物体内存在的酶，安全无副反应，也很少出现过敏症状。欧美国家已于1988年批准它作为一种临床治疗药物。已在化妆品、牙膏和功能性食品中得到广泛应用。第43页，共59页，星期日，2025年，2月5日临床应用范围：A.延缓衰老，清除自由基，阻止自由基连锁反应。B.治疗炎症疾病。C.治疗肿瘤和癌症。第44页，共59页，星期日，2025年，2月5日1995年报道，美国生产的牛血SOD冻干注射剂（商品名奥固肽，Orgotein)已被