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博学之，审问之，慎思之，明辨之，笃行之。——《礼记》

实验：猪精液检查及其冷冻和小鼠的超排及胚胎检查

一．猪精液的检查及其冷冻

主要内容包括：精液品质的肉眼检查及精子活率评定；密度技术检查及生理特性

测定；形态和畸形率的测定；精子顶体染色观察。

（一）精液品质的肉眼检查及精子活率评定

1.实验目的和要求

掌握检查精子密度、评定活率的方法；熟悉肉眼检查精液品质的方法；验证

观察理化因素对精子运动及生存能力的影响。

2.材料和仪器

材料：猪精液。

药品仪器：显微镜、显微镜保湿箱（或显微镜恒温台）、载玻片、盖玻片、搪瓷

盘、温度计、滴管、擦镜纸、纱布、试管、3%和0.9%氯化钠溶液、2%煤酚皂溶

液、1/1000新洁而灭溶液、75%酒精、5%伊红、1%苯胺黑。

精子密度的投影图表。

3.内容和方法

（1）精液的肉眼检查

①射精量将采得的精液倒入有刻度试管或集精杯中，测其容量。猪250

（200~300），。如果精液量过多或过少时，分析其原因。

②色泽和气味家畜的精液通常为乳白色或灰白色，马、猪的精液稀薄，呈灰

白色；家畜精液无味或略有腥味。

③云雾状的观察取原精液一滴于在载玻片上，不加盖玻片，用低倍镜观察精

液滴的边缘部分。可见牛羊的精液翻腾滚动的云雾状态；猪马的精液无此现象。

（2）精子密度的检查（显微镜观测法）及活率评分

①检查精子的密度

取一小滴精液于洁净的载玻片上，盖上洁净的盖玻片，使精液分散成均匀的

一薄层，不存留气泡，也不能使精液外流或溢出于盖玻片上。置于显微镜下放大

100倍观察，按下列等级评定其密度。

②评定精子的活率

于采精后立刻在25℃左右的实验室内进行精子活率的评定，最好在37℃保

温箱内或加热的载物台上进行。在评定精子活率的同时也可以测定精子的密度。

用玻璃棒蘸取一滴原精液或经稀释的精液（猪精液的精子密度低，不须稀释）

滴在洁净的载玻片上，盖上洁净的盖玻片，其间充满精液，不存留气泡。也可滴

在盖玻片上翻放于凹玻片的凹窝上。置于显微镜下，放大250~400倍检查。注意

显微镜的载物台须放平，最好是在暗视野中观察。

精子活率=呈直线前进运动精子数/总精子数×100%

（3）死活精子百分率测定

①方法

1将5%的伊红和1%的苯胺黑按1:1混匀，分装于1~2ml容量的试管中（加入

试管容量的1/2），并在37℃水浴中加温，随后加入原精液1~3滴，摇匀后再放

回水浴中，3分钟后立即取出待用。也可将染液预热后，将伊红、精液及苯胺黑

按照1：1：1~2的比例及顺序滴入预热的凹玻片中混匀染色。

2从以上混合液中用火柴棍沾上一小滴于载玻片的一端，用另一载玻片进行

推动制成抹片，待干燥后，高倍镜镜检（400倍）。抹片时，最好在35~40℃的

非淡泊无以明志，非宁静无以致远。——诸葛亮

条件下制作，而且制作过程要快。也可将制好的抹片放在37~38℃保温箱内干燥

30~60秒。

②结果活精子头部是不易着色的，镜检时，精子头部是透明、无色的。而

死精子则因伊红渗入细胞质，使整个精子头部呈红色。苯胺黑为背景染色，使着

色的精子头部可见。在高倍镜下数200或500个精子，其中分别数出死、活精子

各占的百分率。活精子百分率总是要比精子活率高。

活精子百分率=活精子数/总精子数×100%

4.实验记录