《乳及乳制品中维生素A、D、E的测定 在线固相萃取-中心切割二维液相色谱法》编制说明.pdf

《乳及乳制品中维生素A、D、E的测定在线固相萃取-

中心切割二维液相色谱法》

编制说明

一、工作简况

1.任务来源

国家重点研发计划乳制品全产业链和消费行为NQI集成及应用示范子课题乳品

品质检验方法的改进研究。

2.起草单位

南京市产品质量监督检验院、上海市产品质量监督检验院、上海通标标准技术有

限公司、澳优乳业（中国）有限公司、内蒙古伊利实业集团股份有限公司、内蒙古欧

世蒙牛乳制品有限责任公司

3.主要起草人

徐美玲、张露、王晓丽、陆秀凤、叶沐阳、陈良茜、江雪婷、郭园园、王飞轩、

周荣杰、林毅侃、赵立苹、胡雪、吴腾

二、制定（修订）标准的必要性和意义

本标准适用于乳及乳制品中维生素A、D、E的检测。脂溶性维生素由于其性质

不稳定，还会受环境及实验条件的影响。样品前处理对数据准确性的影响最为关键。

脂溶性维生素以各种形态分布在样品中，前处理需要将基质中的脂溶性物质去除，首

先要进行皂化处理，再进行提取、净化等操作。目前，维生素A、D、E的检测方法

主要有紫外可见分光光度法、薄层层析法、荧光法、气相色谱法和高效液相色谱法、

液质联用法等。对于维生素A、D、E的测定一般参照国家标准《GB5009.82-2016食

品安全国家标准食品中维生素A，D，E的测定》。该标准样品前处理极其复杂，测

定方法多样，同一成分有不同的测试方法，导致测试时间周期长，回收率低，重复性

差，极大降低了分析效率。为了解决国标存在的难点，需要研究一种同时测定维生A、

D、E的稳定高效的在线固相萃取-二维液相色谱方法。

近年来，二维液相色谱技术以峰容量大、基质效应低、分析通量高等特点被广泛

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应用于食品检测行业中。二维液相色谱(2D-LC)是将分离机理不同而又相互独立的两

支色谱柱串联起来构成的分离系统。样品经过第一维的色谱柱进入接口中，通过浓缩、

捕集或切割后被切换进入第二维色谱柱及检测器中。二维液相色谱通常采用两种不同

的分离机理分析样品,即利用样品的不同特性把复杂混合物(如肽)分成单一组分，这

些特性包括分子尺寸、等电点、亲水性、电荷、特殊分子间作用(亲和)等，在一维分

离系统中不能完全分离的组分，可能在二维系统中得到更好的分离,分离能力、分辨

率得到极大的提高。

采用二维液相色谱中的捕集柱切换技术拟通过三泵双阀切换双检测器搭建的二

维液相色谱分离系统，建立了一种可同时实现维生素A、维生素D、维生素E及其同

分异构体的分析检测方法。维生素A、D、E的萃取采用在线固相萃取小柱法代替了

手动液液萃取方式，经皂化后可直接进行仪器分析。维生素D的净化通过一维分析柱

完成并通过捕集柱进行富集再转移至第二维完成分离检测。样品的萃取、净化和转移

均通过切换阀自动实现。维生素D捕集柱的作用是在两维间形成溶质“重新聚焦”。

捕集柱在第一维流动相洗脱条件下对样品的保留能力比第一维强,在第二维流动相洗

脱条件下易于洗脱。当第一维洗脱产物流经捕集柱时，溶质在捕集柱头被富集浓缩，

切换阀后，第二维流动相将经过捕集柱富集浓缩的组分反冲入第二维进一步分离。该

方法的一维和二维系统均采用反相色谱法，一次进样可完成7种化合物的定量分析，

显著提高了检测效率，具有方便快速、安全、操作简单等优点，为复合维生素片中维

生素A、D和E的测定提供了可实施方法和技术支持。

与AOAC及GB5009.82-2016方法分析流程对比：本方法与AOAC及

GB5009.82-2016分析流程对比。其中热皂化可将目标分析物从脂蛋白包裹状态中释放

出来，无论AOAC还是GB方法，液液萃取步骤都使样品制备流程耗时费力，成为制

约整个方法效率的主要瓶颈。而本方法采用onlineSPE替代此步操作，使整个分析流

程变得简便快速。由于样品分析流程简化，也显著改善了样品测定结果的重复性，同

时减少了有机溶剂消耗，因此本方法更加环保。另外AOAC和GB方法需要将含量差

异较大的维生素A、维生素E与维生素D分开测定。本方法采用二维液相色谱结合常

规紫外检测器和高灵敏度的DAD检测器，可实现常量维生素A、维生素E与微量维

生素D的同时定量分析，分析时间只需约25min，整体分析效率提升近