酶工程动植物细胞培养产酶.ppt

动植物细胞培养产酶动物细胞培养产酶动物细胞特性没有细胞壁，细胞脆弱（区别于植物和微生物）体积大，比微生物细胞大几千倍，但稍小于植物细胞在肌体内相互粘连，以群体形式存在在培养时具有群体效应、贴壁依赖性、接触抑制性、功能全能性营养要求复杂（血清培养基）第31页，共45页，星期日，2025年，2月5日动植物细胞培养产酶动物细胞培养产酶动物细胞培养的特点主要用于生产蛋白质生长缓慢容易受污染（细菌、支原体），培养过程中需添加抗生素对剪切力特别敏感（胞外缺少保护结构）大部分具有贴壁依赖性——贴壁培养培养基成分复杂，价格高昂细胞生命有限，一般最多继代培养50代即退化死亡第32页，共45页，星期日，2025年，2月5日Enzyme Engineering关于酶工程动植物细胞培养产酶第1页，共45页，星期日，2025年，2月5日动植物细胞培养产酶概述动物细胞无细胞壁，容易贴壁对营养要求严格（血清培养基）对环境敏感（pH、溶氧、温度、剪切应力）植物细胞有细胞壁，但比微生物的细胞壁脆弱营养要求较动物细胞简单生长缓慢，培养周期长，要达到高密度较困难第2页，共45页，星期日，2025年，2月5日动植物细胞培养产酶概述植物细胞、动物细胞、微生物细胞培养的比较特征哺乳动物细胞植物细胞微生物细胞大小(?m)10～10010～1001～10生长形式悬浮、贴壁悬浮悬浮营养要求很复杂很复杂简单倍增时间(h)15～10020～1200.5～5细胞分化有有限分化无环境影响非常敏感敏感一般产物存在部位胞内或胞外胞内或胞外胞内或胞外产物浓度低低高供氧需求(KLa)1～2520～30100～1000产物种类疫苗、单抗、酶、生长因子、激素等天然色素、天然有机化合物等抗生素、有机小分子、酶等第3页，共45页，星期日，2025年，2月5日动植物细胞培养产酶概述植物细胞与动物细胞、微生物细胞培养的比较动物细胞、植物细胞和微生物细胞可以用相同方式培养动物细胞、植物细胞的生产周期比微生物长植物细胞和动物细胞对剪切力敏感植物、微生物和动物细胞的主要目的产物各不相同动物细胞——蛋白疫苗、抗体、激素、酶（蛋白质或多肽）植物细胞——色素、香精、天然药物（小分子）、酶第4页，共45页，星期日，2025年，2月5日动植物细胞培养产酶本章主要内容动植物细胞中酶生物合成的调节植物细胞培养产酶植物细胞及其培养特点植物细胞培养及产酶的工艺控制动物细胞培养产酶动物细胞及其培养特点动物细胞培养及产酶的工艺控制第5页，共45页，星期日，2025年，2月5日动植物细胞培养产酶动植物细胞中酶生物合成的调节从基因到蛋白质有关微生物细胞中酶合成的调节理论也基本适用于动植物细胞动植物细胞具有比微生物更多的调节方式转录水平调节翻译水平调节激素水平、神经水平调节第6页，共45页，星期日，2025年，2月5日动植物细胞培养产酶动植物细胞中酶生物合成的调节细胞分化改变酶的生物合成——端粒（telomere）端粒是真核生物染色体的末端结构由富含G、T的DNA简单重复序列不断重复而成人端粒序列：……TTAGGG……保护真核生物染色体免遭破坏牺牲自我，填补DNA复制后在5’-端留下的空隙端粒随细胞年龄的增长而逐渐缩短端粒酶（telomerase）——催化端粒合成和延长核糖核蛋白，其中的RNA部分含核苷酸模板序列，可构建端粒重复序列端粒酶一般存在于分化程度较低的细胞中第7页，共45页，星期日，2025年，2月5日动植物细胞培养产酶动植物细胞中酶生物合成的调节基因扩增加速酶的合成通过增加基因的数量调节基因表达，可以发生在个体发育某一阶段或细胞分化某一过程细胞的一种应急方式基因扩增可以由选择压力引起耐药性细胞的抗药性产生例：CHO细胞为对抗氨甲基喋呤对二氢叶酸还原酶的抑制，编码这种酶的基因急剧扩增第8页，共45页，星期日，2025年，2月5日动植物细胞培养产酶动植物细胞中酶生物合成的调节增强子促进酶的生物合成增强子（modulator）——能高效增强或促进基因转录的一段DNA序列增强子能促进同源或异源启动基因的转录活性，可高效增强某些酶基因的表达具有细胞或组织特异性，在不同细胞或组织中增强效果不同第9页，共45页，星期日，2025年，2月5日