DB22T 2961-2019 淡水小球藻室内快速培养技术规范　.docxVIP

ICS65.150B51

DB22

吉林省地方标准DB22/T2961—2019

淡水小球藻室内快速培养技术规范

TechnicalregulationsforindoorcultureoffreshwaterChlorellavulgaris

2019-05-27发布2019-06-17实施

吉林省市场监督管理厅发布

I

DB22/T2961—2019

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由吉林省水利厅提出。

本标准由吉林省农村农业厅归口。本标准起草单位：吉林农业大学。

本标准主要起草人：张东鸣、陈玉珂、王秋举、王森、蔺丽丽、刘洪健、郭志欣、高永生。

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DB22/T2961—2019

淡水小球藻室内快速培养技术规范

1范围

本标准规定了淡水小球藻（Chlorellavulgaris）培养的术语和定义，环境、设备及水，室内培养，采收及注意事项。

本标准适用于淡水小球藻室内培养。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB11607渔业水质标准

NY5073无公害食品水产品中有毒有害物质限量NY/T5361无公害农产品淡水养殖产地环境条件

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。3.1

指数生长期exponentialgrowthphase

在藻细胞达到一定密度后，藻细胞以指数生长的方式快速增殖的时期。3.2

稳定期stablephase

在指数生长期之后，藻细胞新生数与死亡数持平，藻细胞数保持稳定状态。3.3

批次培养batchculture

培养至稳定期后进行一次性采收所有藻液，清洗设备后进行重新接种再次培养。3.4

连续培养continuousculture

培养至稳定期后，采收部分藻液，采收体积不大于总培养体积的80%，之后通过添加培养基进行继续增殖培养。

4环境、设备和水

4.1环境

应符合NY/T5361的规定。

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DB22/T2961—2019

4.2仪器设备

4.2.1酸度计、光度计、显微镜和分光光度计。

4.2.2微孔曝气、光照及二氧化碳供应设备、塑料桶、水族箱、玻璃钢桶、水泥池等。4.3水

应符合GB11607的规定。

5室内培养

5.1消毒

容器未注水之前用10mg/L～20mg/L高锰酸钾浸泡20min～30min，消毒后用大量清水充分清洗，保证设备内壁无高锰酸钾残留。

5.2配置培养基

5.2.1培养基按照表1要求配制。

表1BG11培养基

贮存液

配置体积（mL）

成分

含量（g）

1

1000

NaNO3(+N)/NaCl(-N)

30.00/20.60

K2HPO4·3H2O

0.8000

Na2CO3

0.4000

2

100

柠檬酸

0.3000

柠檬酸铁铵

0.3000

EDTA-Na2

0.05000

3

100

CaCl2·2H2O

1.800

4

100

MgSO4·7H2O

3.750

5

1000

H3BO3

2.860

MnCl2·4H2O

1.810

CuSO4·5H2O

0.0790

Na2MoO4·2H2O

0.3910

Co(NO3)2·6H2O

0.04947

ZnSO4·7H2O

0.2220

6

1000

羟乙基哌嗪乙硫磺酸

119.15

注1：贮存液2容易滋生细菌，高压灭菌后保存于4℃。

注2：贮存液6为保种时用，平时培养可不添加。

5.2.2配制好的培养基用2mol/L的NaOH调pH到7.4～8.0，置于4℃下保存。

5.3保种培养5.3.1容器

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用10L容器进行保种培养。5.3.2条件

光照强度2000Lx～3000Lx，培养温度为（25±1）℃,连续充CO2气体。5.3.3管理

5.3.3.1生长监测

每天检测藻密度。采用血球计数板法计算藻细胞密度，计算出藻液藻细胞密度；或采用分光光度法在680nm波长下测量分光光度值，绘制标准曲线后换算出藻液藻细胞密度。

5.3.3.2更换培养基

稳定期末更换1/2体积培养基。

5.4规模培养5.4.1容器

容器容积控制在1m3~2m3,深度不大于80c