血红蛋白的提取和分离.pdf

2022年高考生物总复习：血红蛋白的提取和分离

(1)蛋白质的分离

①原理：蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、

溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等，可以用来分离不同种类的蛋白质。

②分离方法：a.凝胶色谱法：也称做分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分

离蛋白质的有效方法。

b.电泳法：电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。常用的电泳方法

有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。

(2)实例——血红蛋白的提取和分离

①样品处理与粗分离

②纯化与纯度鉴定

1.相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的行进过程可表示为①～④中的哪一

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种？

提示②，分子质量较大者先洗脱出来，分子质量较小者后洗脱出来。

2.如图所示装置可用于血红蛋白提取、分离的哪种过程？其原理是什么？烧杯内

a溶液是蒸馏水吗？

提示该装置为透析装置，由于透析袋是用硝酸纤维素制成的，小分子可自由进

出，而大分子保留在袋内，故可用于除去小分子杂质。烧杯中的a溶液应为20

mmol·L－1的磷酸缓冲液，不可使用蒸馏水。

3.(教材P70“练习”改编)红细胞为何适于作蛋白质分离的材料？

提示血红蛋白是有色蛋白，因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什

么时候应该收集洗脱液。这使血红蛋白的分离过程非常直观，大大简化了实验操

作。

血红蛋白的提取和分离

1.(广东卷)以下关于猪血红蛋白提纯的描述，不正确的是()

A.洗涤红细胞时，使用生理盐水可防止红细胞破裂

B.猪成熟红细胞中缺少细胞器和细胞核，提纯时杂蛋白较少

C.血红蛋白的颜色可用于凝胶色谱法分离过程的监测

D.在凝胶色谱法分离过程中，血红蛋白比分子量较小的杂蛋白移动慢

解析凝胶色谱法分离蛋白质过程中，分子量较小的蛋白质易进入凝胶内部，移

动速度比较慢，故血红蛋白比分子量较小的杂蛋白移动快，D错误。

答案D

2.红细胞中含有大量血红蛋白，我们可以选用猪、牛、羊或其他哺乳动物的血液

进行实验来提取和分离血红蛋白。下图为血红蛋白的提取和分离流程图。请回答

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下列问题。

(1)将实验流程补充完整：A为________________，B为________________。凝胶

色谱法是根据________________分离蛋白质的有效方法。

(2)红细胞洗涤时洗涤次数不能过少，否则________________；离心速度过高和

________________会使白细胞等一同沉淀，达不到分离的效果。

(3)为了加速膨胀，可以将加入洗脱液的湿凝胶用________________法进行加热，

这种方法不但节约时间，而且能除去凝胶中可能带有的微生物，排除胶粒内的

________。

(4)如果红色区带________________________，说明色谱柱制作成功。

答案(1)血红蛋白的释放样品的加入和洗脱相对分子质量的大小(2)无法

除去血浆蛋白时间过长

(3)沸水浴空气(4)均匀一致地移动

“血红蛋白的提取和分离实验”中的注意事项

(1)红细胞的洗涤：洗涤次数不能过少，否则无法除去血浆蛋白；要低速、短时

离心，否则会使白细胞等一同沉淀，达不到分离的效果。

(2)凝胶的预处理：用沸水浴法不但节约时间，而且除去凝胶中可能带有的微生

物，排除胶粒内的空气。

(3)色谱柱的装填：装填时尽量紧密，减小颗粒间隙；无气泡；洗脱液不能断流。

(4)色谱柱成功的标志：红色区带均匀一致地移动。

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