苦荞淀粉分支酶基因(FtBE2)的功能研究.pdf

目录

摘要I

ABSTRACTIV

1绪论1

1.1淀粉的基本性质与分类1

1.2淀粉的生物合成1

1.2.1腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（AGPase）3

1.2.2淀粉合酶（Starchsynthase）5

1.2.3淀粉分支酶（Starchbranchingenzyme）7

1.2.4淀粉磷酸化酶（Starchphosphorylase）7

1.3苦荞的研究进展8

1.3.1苦荞的营养价值研究8

1.3.2苦荞淀粉的特性和形态结构研究8

1.3.3苦荞淀粉含量遗传多样性研究9

1.4淀粉分支酶BE基因的研究进展10

1.4.1BE基因的分类10

1.4.2BE基因的结构特征及功能11

1.4.3BE基因的表达特性及作物中的研究进展11

1.5淀粉合成调控机制的研究进展13

1.6研究目的与意义14

2实验材料与实验方法15

2.1实验材料15

2.1.1植物材料种植和取样15

2.1.2菌株与载体15

2.1.3实验试剂15

2.1.4实验培养基配制及溶液配制16

2.1.5实验仪器及设备18

2.1.6引物合成及DNA测序19

2.2实验方法20

2.2.1DNA提取20

2.2.2总RNA提取20

2.2.3RNA反转录21

2.2.4实时荧光定量PCR21

2.2.5FtBE2基因及其启动子序列和FtNAC74基因的克隆22

2.2.6生物信息学分析25

2.2.7载体构建26

2.2.8水稻遗传转化28

2.2.9淀粉含量测定30

2.2.10酵母单杂交30

3结果分析34

3.1FtBE2基因的克隆和生物信息学分析34

3.1.1FtBE2基因的克隆34

3.1.2FtBE2与OsBE3基因的序列分析34

3.1.3苦荞FtBE蛋白系统进化分析37

3.2FtBE2基因的表达分析38

3.3水稻的遗传转化39

3.3.1利用CRISPR/Cas9基因编辑系统构建OsBE3突变体39

3.3.2苦荞FtBE2在水稻OsBE3突变体中的遗传转化分析44

3.4FtBE2基因的表达受FtNAC74的调控48

3.4.1苦荞FtBE2基因启动子序列的克隆48

3.4.2苦荞FtBE2启动子序列上的顺式作用元件进行预测49

3.4.3苦荞FtNAC74基因组织特异性表达49

3.4.4苦荞FtNAC74基因的克隆50

3.4.5酵母单杂交验证实验51

4讨论54

4.1FtBE2基因的结构分析及鉴定54

4.2苦荞FtBE2的蛋白质系统进化分析54

4.3FtBE2的表达分析54

4.4水稻的遗传转化55

4.5酵母单杂交验证