细胞融合和体细胞杂交.pptVIP

电融合电场来诱导细胞彼此连接成串，再施加瞬间强脉冲促使质膜发生可逆性电击穿，促进细胞融合的技术。原理：在直流电脉冲的刺激下，原生质体质膜表面的电荷发生改变，使异种细胞或原生质体粘合并发生质膜瞬间破裂，进而连接，直到闭合成完整的膜形成融合体。优点：融合率高、重复性与可控制性强。缺点：可能会造成不可恢复的细胞损伤。细胞电融合仪生物法病毒诱导细胞融合：研究最早的细胞融合诱导方法。主要是由于病毒会与宿主细胞膜直接融合，同时进入两个细胞就会打破两个细胞膜的隔阂，引发细胞质的交流，进而达到细胞融合的目的。缺点：要提前大量培养病毒，并且灭活后才能作为融合剂使用，操作繁琐，而且一旦灭活不充分的话，病毒还可能感染亲本细胞。因此，目前已经很少使用病毒诱导法进行细胞融合。010203有丝分裂，细胞核融合，形成杂种细胞。通过病毒与原生质体或细胞膜的作用使两个细胞膜间互相渗透，胞质互相融合。粘结部位质膜被破坏，不同细胞间形成通道，细胞质流通并融合（病毒也随之进入细胞质）。足够量的病毒颗粒附着在细胞膜上起搭桥作用，使细胞聚集在一起。原生质体的融合过程异种原生质体先经膜融合形成共同的质膜，然后经胞质融合，产生细胞壁，最后是核融合。细胞核的融合是异种原生质体融合的关键。融合体只有成为单核细胞后才能继续生长，才能合成DNA、RNA，四异核体的核融合取决于二亲本原生质体发育周期的同步程度和系统发育关系的远近以及培养基对二亲本原生质体的有利程度1异核体的核融合和染色体的行为一般是在两亲本核同步分裂过程中发生的。第一次有丝分裂；这就要求两个核必须同步分裂，如果两个核所处时期不同，一个开始合成DNA，另一个还处于合成的中途或已完成了复制，它们之间就会相互影响，导致最终不能进行细胞分裂。2亲缘关系对融合体发育的影响种内和亲和的种间：不亲和属间、科间：核融合失败，染色体丢失、重排或形成嵌合体。即使属间能发育成植株，也是不育的。01海藻+胡萝卜，在第一次分裂后，一亲本核即退化。Hela+胡萝卜，胡萝卜核退化。02细胞融合是一个随机的物理过程，经融合后细胞将以多种形式出现，需要通过培养和筛选，除去不需要的细胞，分离出需要的杂种细胞，从而解决融合细胞的选择问题。问题：A与B融合过程中，有哪些形式的细胞吗？互补选择法机械分离杂种细胞法双荧光标记选择法选择融合体或杂种细胞*例如：生殖细胞不能融合，或受精卵不能发育，或子代无繁殖能力等。种内不亲和性：种内个体间的不亲和现象往往是受不亲和基因所制约而并不是染色体组不同的结果。物种是自然界能够交配、产生可育后代，并与其他种存在有生殖隔离的群体。细胞中的一组非同源染色体，它们在形态和功能上各不相同，但是携带着控制一种生物生长发育、遗传和变异的全部信息，这样的一组染色体，叫做一个染色体组。*一般情况下，通过生殖细胞相互融合而达到这一目的过程称为杂交。较多的是种间、种内杂交。由体细胞相互融合达到这一结果的过程称为体细胞杂交。*形成的原因：由不同细胞间胞间连丝的扩展和粘连造成的。减少自发融合的措施：在用酶液处理之前，使细胞受到强烈的质壁分离药物的作用，切断胞间连丝。**ContentLayoutsNaNO3的钠离子可以中和原生质体表面负电荷，引起原生质体聚集，促进细胞融合。但融合效率低，一般小于4%。*钙离子中和原生质体膜或细胞膜表明表面电荷，使彼此紧密接触，决定质膜的稳定性和可塑性；高pH能改变质膜的表面电荷，利于细胞融合。*PEG分子具有轻微的负极性，可以与具有正极性基团的水分子、蛋白质、碳水化合物形成氢键，在相邻的原生质体间起到分子桥的作用，使原生质体接触。当PEG分子被洗脱时，膜电荷发生紊乱而重新分配。此时，一种原生质体上带正电的基团可能与另外一个原生质体中带负电的基团相连，导致原生质体融合。*在双亲亲缘关系较近的异核体中，两个核有可能同步进行第一次有丝分裂，而且在这个过程中，二者的染色体被一个共同的纺锤体所牵引，在有丝分裂末期形成两个杂种子细胞。最终分化出体细胞杂种，其核内具有双亲的染色体组。植物的抗逆性多为多基因控制，因此易于实现多基因控制性状。*Pomato(泡马豆）*第五章细胞融合与体细胞杂交远源杂交远缘杂交：不同种属之间，或是地理上远缘的种内亚种之间个体的交配称为远缘杂交。由于种属间存在着种种隔离机制，致使远缘杂交常表现不亲和或获得的远缘杂种表现不育。01不亲和性：在有性生殖过程中，由于个体细胞或组织水平上的不协调而使受精或接合不能正常进行，或是受精后不能产生后代的现象。02双亲个体间基因型的不协