DB32T 1771-2011 猪支原体肺炎诊断技术.docxVIP

ICS65.020.30

B41

备案号：

DB32

江苏省地方标准DB32/T1771—2011

猪支原体肺炎诊断技术

DiagnosticTechniquesforMycoplasmalpneumoniaofswine

2011-05-06发布2011-07-06实施

江苏省质量技术监督局发布

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DB32/T1771—2011

前言

为规范猪支原体肺炎诊断技术，特制定本标准。

本标准按GB/T1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》编制。

本标准由江苏省农业科学院提出。

本标准起草单位：江苏省农业科学院。

本标准起草人：刘茂军、邵国青、冯志新、王海燕、周勇岐、苏国东、孙佩元、甘源。

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DB32/T1771—2011

猪支原体肺炎诊断技术

1范围

本标准规定了猪支原体肺炎的诊断技术。

本标准规定的分离鉴定和PCR法适用于本病的确诊，间接血凝试验和ELISA试验适用于大批量样品的普查。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修订单）适用于本文件。

GB/T6682—2008分析实验室用水规格和试验方法

GB16548病害动物和病害动物产品生物安全处理规程

NY/T541动物疫病实验室检验采样方法NY/T1186猪支原体肺炎诊断技术

DB32/T1461猪肺炎支原体检测PCR法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准3.1

猪支原体肺炎

猪支原体肺炎（Mycoplasmalpneumoniaofswine，MPS)，俗称为猪气喘病或猪地方流行性肺炎（EnzooticPneumoniaofSwine,EPS）。它是由猪肺炎支原体（Mycoplasmahyopneumoniae）引起的一种呼吸道疾病，是全世界广泛存在的一种严重危害养猪业健康发展的主要猪病之一。我国是世界养猪大国，每年在MPS上损失百亿元以上。本病还诱导免疫缺陷，特别是当前蓝耳病广泛的存在，混合感染给养猪业带来更大损失，对规模化养猪意义重大。我国将其列为二类动物疫病。

4流行病学诊断

4.1易感动物

猪气喘病仅发生于猪，不同品种、年龄、性别的猪均能感染，其中以哺乳猪和幼猪最易感，发病率高，病死率低；其次是妊娠后期的母猪和哺乳母猪，育肥猪发病较少。

4.2易感季节

一年四季均可发生，但冬春寒冷季节较多见。4.3诱发因素

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DB32/T1771—2011

猪舍通风不良、猪群拥挤、气候突变，阴湿寒冷、饲养管理和卫生条件不良可促进本病发生，加重病情。

5临床诊断

5.1急性型

病猪剧喘，腹式呼吸或犬坐姿势，时发痉挛性阵咳。体温一般正常。食欲大减或废绝，日渐消瘦。病程约1周，病猪常因窒息而死，病死率高。

5.2慢性型

长期咳嗽，清晨进食前后及剧烈运动时最明显，严重的可发生痉挛性咳嗽。病猪体温不高，但消瘦，发育不良，被毛粗乱。病程长达2个月～3个月，有的在半年以上，病死率不高。

6病理学诊断

6.1大体病变

特征性病变是肺的心叶、尖叶和膈叶前缘发生对称性的紫红色到灰色的实变，肺门淋巴结肿大、增生。刀切肺脏，质度变硬、重量增加，气管中有黏液性渗出物。病死猪及病料应符合按GB16548的规定。

6.2组织学病变

典型病变组织通过用常规的病理切片、染色、脱色后观察，支气管和细支气管上皮组织纤毛数量减少，小支气管周围的肺泡扩大，泡腔充满多量炎性渗出物，肺泡间组织有淋巴样细胞增生。急性病例中，扩张的泡腔内充满浆液性渗出物，杂有单核细胞，中性粒细胞，少量淋巴细胞和脱落的肺泡上皮细胞。慢性病例，其肺泡腔内的炎性渗出物中，主要是淋巴细胞浸润。

7病原学诊断

7.1病原分离与鉴定7.1.1材料准备

除另有规定，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682—2008的灭菌二级水。

Hanks液,KM2液体培养基，KM2固体培养基,兔抗猪肺炎支原体高免血清和健康兔血清，灭菌棉拭子。7.1.2病料采集

按NY/T541规定的方法采样。病猪用棉拭子深擦病猪的喉头或鼻腔，采集呼吸道分泌物。病死猪及剖杀猪，无菌操作采取具有特征的病肺与健肺连接处的肺组织。

7.1.3病原分离

7.1.3.1液体培养

将病肺组织切成2mm3以下的碎块，浸入Hanks液中洗涤，除去血液和组织碎块，取3块～5块浸泡在盛有5mLKM2液体培养基的