高中生物第五章第二节多聚酶链式反应扩增NDA片段1新人教版选修1.ppt

关于高中生物第五章第二节多聚酶链式反应扩增NDA片段1新人教版选修1第1页，共30页，星期日，2025年，2月5日★分子生物学研究中最强大的实验技术之一★其本质是在体外模拟胞内DNA分子复制的过程美国科学家穆利斯(K.B.Mullis)发明了PCR技术,1993年诺贝尔奖基础知识第2页，共30页，星期日，2025年，2月5日㈠.DNA分子的结构C、H、O、N、P1.元素组成：脱氧核苷酸2.基本单位:脱氧核苷酸脱氧核苷磷酸脱氧核糖含氮碱基嘌呤嘧啶腺嘌呤（A）鸟嘌呤（G）胞嘧啶（C）胸腺嘧啶（T）第3页，共30页，星期日，2025年，2月5日通常将DNA的羟基“－OH”末端称为3’端，而磷酸基团的末端称为5’端3.多脱氧核苷酸链得形成多脱氧核苷酸链结构简图磷酸二酯键第4页，共30页，星期日，2025年，2月5日4.DNA分子的双螺旋结构⑴DNA分子是由的（即一条链为3’－5’，另一条链为5’－3’）脱氧核苷酸长链盘旋而成的规则结构。⑵与交替连结，排列在外侧，构成基本骨架；排列在链的内侧。⑶两条链上的碱基通过连结起来，形成碱基对。碱基对的组成有特定的规律：即腺嘌呤一定与配对，一定同胞嘧啶配对。双螺旋两条反向平行脱氧核糖磷酸碱基氢键胸腺嘧啶鸟嘌呤第5页，共30页，星期日，2025年，2月5日㈡.DNA的复制2.时期有丝分裂间期或减数第一次分裂前的间期。3.场所细胞核（主要）、线粒体、叶绿体。1.概念由一个DNA形成两个完全相同的DNA的过程。4.基本条件酶:解旋酶、DNA聚合酶能量:ATP原料:四种脱氧核苷酸模板:DNA的两条链第6页，共30页，星期日，2025年，2月5日⑴.边解旋边复制(过程）5.复制特点⑵.半保留复制（结果）6.遵循原则：碱基互补配对原则7.精确复制的原因8.复制的意义DNA分子通过复制使遗传信息从亲代传给了后代，从而保持了遗传信息的连续性⑴规则的双螺旋结构为复制提供了精确的模板⑵碱基互补配对能力保证了复制准确无误的进行第7页，共30页，星期日，2025年，2月5日小结：胞内DNA复制的基本知识使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸引物提供能量ATP催化合成DNA子链DNA聚合酶合成子链的原料4种脱氧核苷酸提供DNA复制的模板DNA母链打开DNA双链解旋酶在DNA复制中的作用参与的成分第8页，共30页，星期日，2025年，2月5日㈢.PCR(多聚酶链式反应）2.TaqDNA聚合酶特性高温的TaqDNA聚合酶解决了高温导致DNA聚合酶失活的问题，促成了PCR技术的自动化不能从头合成DNA，只能从DNA母链的的3′端开始延伸DNA链，或者总是从子链的5′端向3′端延伸因此，DNA复制需要引物。1.定义：是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。能以极少量的DNA为模板，在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。第9页，共30页，星期日，2025年，2月5日第10页，共30页，星期日，2025年，2月5日3.PCR原理⑴在80－100°C的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为变性。⑵当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链。⑶PCR利用了DNA的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合，现在使用的PCR仪实质上也是一台能够自动调控温度的仪器。第11页，共30页，星期日，2025年，2月5日4.需要为PCR反应提供的物质缓冲液、DNA模板，分别与两条模板链相结合的两种引物，四种脱氧核苷酸，耐热的DNA聚合酶，同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行。PCR技术是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。它具有特异、敏感、产率高、快速、简便、重复性好、易自动化等突出。5.PCR技术的特点：第12页，共30页，星期日，2025年，2月5日6.细胞内和细胞外DNA复制环境的区别体内DNA的复制PCR模板(母链)细胞内源外源加入引物引物合成酶外源加入原料:dNTP细胞内源外源加入聚合酶细胞内源外源加入反应环境细胞内的环境缓冲液第13页，共30页，星期日，2025年，2月5日⑴PCR过程需要的引物不是RNA，而是人工合成的DNA单链，其长度通常为20－30个脱氧核苷酸7.细胞内复制和PCR不同点⑵PCR过程中DNA的解旋不