疫组化1-概论抗原抗体.pptVIP

免疫组化Immunohistochemistry1.熟悉免疫组织化学技术特点及其原理2.掌握免疫组织化学染色的操作流程3.熟悉免疫化学反应相关术语及其所用免疫试剂的来源和质量控制了解多克隆抗体制备程序与操作要求了解单克隆抗体制备原理和步骤010302学习本章节的总体要求概论什么是免疫组织化学免疫组织化学是应用免疫学和组织化学原理，对细胞组织标本中的某些多肽、蛋白质等大分子物质进行定性、定位、定量研究的一门科学。这项技术本质上是一种染色及原1位示踪技术，它是在酶组织化学基础2上发展起来的，始于20世纪中期。3二、发展历史01020304免疫荧光标记抗体技术---Coons1940年免疫酶标抗体技术---Abakane1963不标记酶抗体（酶抗酶复合物）技术---Sternberger1970胶体金免疫标记技术和亲和标记技术---Hsu1985免疫试剂，自1975年Kohler和Milstein发明了单克隆抗体制备的杂交瘤技术后，已从采用多克隆抗体转入了广泛应用单克隆抗体时代。目前商品供应的特异性第一抗体和交联第二抗体，绝大多数都为单克隆抗体。特异性强专一敏感性高检测阈值达ng或pg水平定位准确既可定性、定位，又可定量三位一体形态、功能和代谢三结合缺点：干扰多，易出现假阳性技术特点（优点）处理与切片选择免疫染色的前处理试剂准备（示踪，放大，标记）消化阻断（三）免疫组化染色原理、优缺点、流程免疫染色的后处理增强、衬染、封固四、免疫组织化学染色操作步骤关键步骤：特异抗体-----桥联抗体----标记抗体种系必需匹配程序雷同方法众多（第一抗体）（第二抗体）（第三抗体）按需选用（五）结果判断与对照设置敏感不同第一节抗原和抗体凡能刺激机体产生特异性免疫应答（免疫原性），并能与相应免疫应答物（抗体或致敏淋巴细胞）在体内、外发生特异性结合（反应原性）的物质。010102抗原的免疫原性取决于抗原的①异物性；②大分子；③表面积；④专一决定簇等。02一、抗原：免疫原性反应原性完全抗原completeantigen有有半抗原hepten无有半抗原＋载体蛋白全抗原载体蛋白：BSA、多聚赖氨酸、牛甲状腺球蛋白等；（免疫原性强，易获得，交叉反应易去除）交联要求：不改变半抗原的分子构型；远离半抗原的抗原决定簇；高结合率（结合半抗原数目至少20个以上）交联剂抗原决定簇(表位)：抗原分子中决定抗原特异性的活性化学基团，其性质、数量、空间构型决定抗原的特异性。--免疫组化的精确性、特异性交叉反应：抗原（或抗体）除与其相应抗体（或抗原）特异结合外，有时可与其他抗体（或抗原）发生反应。--不同抗原的表位相同或相似的情况下可发生交叉反应--多数天然抗原表面带有多个相同或不同的表位--免疫组化的假阳性--可与相应抗原特异性结合--亦可作为抗原，激发免疫应答B细胞在抗原刺激下增殖分化为浆细胞所产生的糖蛋白，又称免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）。二、抗体抗体分子在立体构型上都是Ig，但Ig不都是抗体。各类Ig的基本单位都是四条肽链的对称结构,包括二条相同的重链(heavychain,H链),及二条相同的轻链(lightchain,L链),每条重链(H链)和轻链(L链)分为氨基端(N端)和羧基端(C端)。抗体的分子结构.两条重链间，两条轻链间及重链和轻链间，分别借二硫键连接。此为免疫球蛋白的基本结构，又称为免疫球蛋白的单体,呈“Y”字构型。重链上结合有不同量的糖,故Ig属糖蛋白。根据重链抗原性的不同可分为5类，即μ链，γ链，α链，δ链和ε链，由它们组成的Ig分别称为IgM，IgG，IgA，IgE和IgD。轻链也可根据其化学结构和抗原性的差异分为κ和λ二型。一个Ig分子的二条轻链型别相同，绝无可能κ型和λ型共同存在于同一个Ig分子中。01Ig单体的氨基酸序列可分为恒定区（constantregion,C区)和可变区（variableregion,V区）。02--可变区位于Ig多肽链的N端，占轻链的约1/2及重链的约1/4（Ig结合抗原的所在部位）03--恒定区位于Ig多肽链的C端，占轻链的余下的1/2及重链的3/4（补体结合域，Fc受体结合位点，I