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3.1限制性酶切作图
3.2基于克隆的基因组作图
3.3荧光标记原位杂交作图
3.4序列标签位点(STS)作图
3.5人类基因组图谱
物理作图:采用分子生物学技术直接将DNA分子
标记、基因或克隆标定在基因组的实
际位置
绘制物理图的方法
限制性作图(Restrictionmapping)
克隆重叠群(Clone-basedmapping)
荧光标记原位杂交(Florescentinsitu
hybridization,FISH)
序列标签位点作图(sequencetaggedsite,
STS)
基因组光学图谱技术
限制性作图(Restrictionmapping):将限
制性酶切位点标定在DNA分子的相对位置
原理:比较不同限制酶切产生的DNA片段的大小。
第一种酶切:电泳确定DNA片段的大小,第一组片段
第二种酶切:电泳确定DNA片段的大小,第二组片段
两种酶混合酶切:第三组片段
利用加减法确定酶切位点的相对位置。
5
小于50kb的DNA片段,常采用6碱基识别顺序
的限制酶
大于50kb的DNA片段:稀有切点的限制酶
稀有切点的限制酶的选用:
1识别序列越长则产生的片段越长
2识别位点的碱基组成
3通过转座子引入较长的识别位点
4基因组DNA的甲基化状态
大片段的
交变电场
电泳分离
原理:一个方向不断变换的电场取代简单的电场,
使电泳中受阻的DNA分子在电场改变时扭转迁移
方向,达到分离的目的
大肠杆菌基因组物理图
E.coli基因
组NotI限制
性酶切位点
物理图
大片段DNA文库的构建
克隆重叠群的组建
指纹作图
大片段基因组文库的构建
基因组DNA的分离克隆载体的制备
基因组片段与
载体的连接
连接产物在受体细
胞的转化和增殖
重组子的筛选、
鉴定和保存
11
大片段克隆载体
P1
YAC(YeastArtificialChromosome)
BAC(BacterialArtificialChromosome)
MAC(MammalianArtificialChromosome)
PAC(P1-derivedArtificialChromosome)
BIBAC(Binary-BAC)
TAC(Transformation-competentartificialchromosome)
酵母人工染色体(YAC)载体
1983年Murray等人将酵母菌着丝点、复制原点、
端粒组装在一个载体上,构建了第一个酵母人工
染色体。
1987年Burke等构建了一个YAC载体,将人的
DNA大片段插入YAC。
YAC载体插入片段大(理论上大于10
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