网格蛋白轻链基因CLCs调控拟南芥缺铁和镉胁迫响应的分子机制.pdf

摘要

铁是人体必需的微量元素之一，缺铁可引起贫血症的发生。植物是人体膳食铁

的主要来源，虽然土壤中富含铁，但是铁的生物有效性较低，导致植物极易缺铁，

出现失绿现象。提高植物对铁的吸收对于农作物品质的提升以及人类健康十分重要。

IRT1是拟南芥中重要的铁转运蛋白，同时还转运锌、锰、镉等。镉作为一种常见的

重金属污染物，对植物有毒害作用，其能在植物可食部位富集，并通过食物链积累，

最终危害人类健康。网格蛋白介导的内吞是细胞实现物质跨膜转运的主要方式，于

是，我们提出科学问题：网格蛋白介导的内吞是否参与植物根细胞对铁及镉的转运，

其作用机制如何？本研究以网格蛋白轻链基因缺失突变体clc2clc3为主要研究对象，

旨在揭示网格蛋白介导的内吞调控植物响应缺铁和镉胁迫的分子机制。主要研究结

果如下：

（1）缺铁条件下，与野生型植株相比，clc2clc3双突变体对缺铁不敏感；对根

系高铁还原酶活性的测定结果显示，缺铁胁迫下clc2clc3中该酶活性显著高于野生型

对照。铁吸收关键转录因子FIT1、bHLH38、bHLH39、bHLH100、bHLH101及其下

游基因AHA2、FRO2、IRT1的表达测定结果显示，与野生型对照类似，缺铁显著上

调了clc2clc3中上述基因的表达，但是其表达水平相较于野生型均显著降低。

（2）虽然不同浓度的镉胁迫均会引起野生型和clc2clc3双突变体的根长下降，

但是在相同的镉处理浓度下突变体的根长和鲜重均显著高于野生型对照。并且，双

突变体根和茎中的镉积累量均显著低于野生型，表明双突变体可通过降低镉的吸收，

使植株表现出镉耐受性。进一步，本研究发现镉处理会显著诱导CLCs基因上调表达，

而在镉胁迫下负责镉离子向根部细胞转运的关键基因FIT1和IRT1在双突变体中的

表达明显低于野生型。

（3）本论文利用WT;ProIRT1::IRT1-GFP/ProCLC3::CLC3-RFP拟南芥双荧光植株，

发现CLC3和IRT1显著共定位。对比IRT1在WT和clc2clc3背景下在质膜上的分

布，发现缺铁条件下，clc2clc3较WT而言，IRT1在质膜上的分布增加；clc2clc3在

缺铁加镉条件下IRT1在质膜上的分布较缺铁条件下明显降低。该结果表明在缺铁及

镉胁迫下，CLCs通过调节IRT1在细胞膜上的分布来影响根细胞对铁离子和镉离子

的转运。

综上所述，本研究发现网格蛋白轻链基因缺失突变体clc2clc3表现出对缺铁及镉

I

胁迫的明显耐受。进一步的研究发现，CLCs不仅在转录水平影响铁离子和镉离子转

运相关基因的表达，还通过影响IRT1蛋白在质膜上的分布来影响植物对上述两种离

子的吸收。本研究不仅有助于植物响应缺铁及镉胁迫基因调控网络的建立，还为重

金属污染土壤的植物修复以及提高农作物品质和保障食品安全提供了新的基因资源

和技术途径。

关键词：拟南芥；网格蛋白；缺铁胁迫；镉胁迫；内吞

II

ABSTRACT

Ironisoneoftheessentialtraceelementsofhumanbody,andirondeficiencycan

causeanemia.Plantsarethemainsourceofdietaryironinthehumanbody,althoughthe

soilisrichiniron,thebiologicalavailabilityofironislow,resultinginplantsthatare

pronetoirondeficiencyandchlorosis.Increasingironuptakebyplantsisimportantfor

improvingcropqualityandhumanhealth.I