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2肿瘤标志物
定义:
观念上肿瘤标志物是从病人血液,尿液或其他样本中找到的某一肿瘤
的生化分析物。例如,肝癌的癌胚抗原。另外,它们的相关性将通过
肿瘤标志物定量,在特定标准值以上来说明肿瘤的存在。最后,肿瘤
标志物的数量会提示有多少种肿瘤存在或肿瘤的发展处于哪个阶段,
并不是所有的标志物都满足定义的标准。
肿瘤标志物的临床限制:
不幸的是,大多数肿瘤标志物对某个已知肿瘤既没有特异性也
不能通过定量来判断它们的大小。大多数肿瘤标志物都存在这样的限
制性。每种肿瘤的特异性和敏感性能够作为肿瘤的筛选或其定量的指
标,需长期评估直至肿瘤标志物的临床和分析的结果出现显著的统计
学意义。
当病人被怀疑患有癌症时,医生会要求做肿瘤标志物的定量,在
大多数病人中,癌胚抗原有一个正常范围,大约0-10ug/L,但它不是
一个很好的筛选指标,因为在其他情况下,如抽烟,酒精性肝硬化,
肠炎或慢性肺部疾病时,它也可能高于10ug/L。因此,尽管15ug/L
高于那些不抽烟的正常人的参考区间,但这样的值反应的是病人潜在
的慢性肝病,肠部疾病或肺部疾病,而不是肿瘤的存在。这种限制性
使得癌胚抗原不能通过定量来筛选胃肠道肿瘤。一个确诊的肿瘤患者
的癌胚抗原的显著升高能被临床检测出来。如果肿瘤因治疗而好转,
癌胚抗原水平通常会下降,如果升高这就是试验性的证据,说明肿瘤
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持续恶化,而病人会被认为预后不良。
肿瘤标志物的实验室检测:
尽管肿瘤标志物可能被定性的检出它们是否存在,但它们更多地进行
定量检测和与正常参考值做对比来考虑是否升高。生化技术用于检测
这些分析物的变化,这些技术包括从传统的酶学检验,免疫分析到细
胞遗传学技术。标志物的生化种类和浓度范围通常决定检测的方法与
要求,现在免疫学方法是盛行的定量检测肿瘤标志物的方法。从历史
上看,放免技术是第一种普遍用于检测这些分析物的方法。这种方法
用放射活性作为一种性能来定量抗原抗体反应。最近,通过商业化的
发展使得各种方法避免了放免技术所存在的弊端。例如,检测放射性
物质,文献的要求和试剂盒短的有效期。新的方法是利用分光光度酶
率检测.荧光物质.极化荧光素.时间分辨荧光和化学发光去定量抗原
抗体。以下是这个章节中大多数肿瘤标志物的定量方法。
3聚合酶链反应(PCR)
PCR技术是研究得最深入,运用得最广泛的靶技术,X公司的科学
家在1985年第一次介绍了什么是PCR,之后PCR发展成为了分子生
物学实验室的一项主要的技术,这个方法是利用寡核苷酸指导DNA
合成的重复循环,来实现目的序列的体外复制。寡核苷酸的序列是由
目的基因来决定的,这些寡核苷酸是在具有两条不同链的靶序列的互
补位点上开始合成的。它们之间大约相隔150-3000个碱基对。
PCR的每个循环包括3个步骤:1变性,在缓冲体系中,靶基因在高
温下孵化以致于靶链解离。同时加入特定的寡核苷酸引物。2退火,
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在这个混合反应体系中,需降温才能使互补的靶序列间发生退火结
合。3延伸,延伸阶段通常需在温和的温度下进行。引物在DNA聚
合酶的作用下,于DNA模板上延伸。每一次循环靶序列在理论上会
增加一倍(但实际上最后的几次循环没有这么高的效率)。重复了多
次以后(约20-60次),靶序列可扩增100万倍,特定的靶序列扩增
产物能通过它特定的长度和内部结构来识别。而非特异性扩增产物很
少具有与特定靶序列产物一样的大小,并且这些非特异性产物也不含
有与特定靶序列的杂交结构。
在传统的杂交方面,由不完整的碱基组成的引物,可通过非特异性的
方法进行退火反应,他能够结合在靶基因的多个位点上,或者纯化基
因组DNA,因此,对于低丰度的靶基因,非特异性结合的背景,或
许比特异性的还要敏感。然而PCR反应,需要通过两个特异性引物
反应来解决这个问题。这两个引物,在对应链的相对方向的退火位点
上开始合成。为了能更有效地进行聚合酶链反
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