T BPMA 24—2024 生活饮用水中诺如病毒定量检测 实时荧光PCR方法.pdfVIP

ICS07.100.20

CCSC51

BPMA

北京预防医学会团体标准

T/BPMA24—2024

生活饮用水中诺如病毒定量检测

实时荧光PCR方法

QuantitativedetectionofNorovirusindrinkingwater—

Real-timePCRMethod

2024-04-23发布2024-04-23实施

北京预防医学会发布

生活饮用水中诺如病毒定量检测

实时荧光PCR方法

1范围

本文件描述了生活饮用水中诺如病毒富集和实时荧光定量检测方法。

本文件适用于市政管网末梢水、二次供水、自备井水中诺如病毒GI/GII群的定量检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T5750.2生活饮用水标准检测方法水样的采集与保存

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

诺如病毒Norovirus，NoV

杯状病毒科，诺如病毒属，分子结构为单股正链RNA病毒，基因组长度为7kb~7.5kb，病毒直径约

为26nm~35nm，无包膜，表面粗糙，球形，呈二十面体对称。

注：诺如病毒分10个基因群GI~GX，GI、GII是引起人类急性胃肠炎的两个主要基因群。

4设备和材料

实时荧光PCR仪。

微生物快速富集系统：配套使用中空纤维型滤膜，孔径0.05μm。

涡旋振荡器。

核酸提取仪。

微量移液器及其无RNase带滤芯移液器吸头：10μL、20μL、200μL、1mL。

1.5mL无RNase离心管、无RNasePCR管或PCR板。

5试剂

诺如病毒GI/GII基因组引物、探针如下：

诺如病毒GI基因组引物、探针：

GI上游引物：5’-CGCTGGATGCGNTTCCAT-3’

GI下游引物：5’-CCTTAGACGCCATCATCATTTAC-3’

GI探针：5’-VIC-TGGACAGGAGAYCGC-MGB-3’

诺如病毒GII基因组引物、探针：

GII上游引物：5’-ATGTTCAGRTGGATGAGRTTCTCWGA-3’

GII下游引物：5’-TCGACGCCATCTTCATTCACA-3’

GII探针：5’-FAM-AGCACGTGGGAGGGCGATCG-BHQ1-3’

RNA提取试剂盒。

一步法RT-qPCRMix（Taqman）试剂盒。

注：可选用诺如病毒核酸检测试剂盒。

诺如病毒核酸标准品试剂盒：线性化标准质粒。如：

a)GI诺如病毒(GenBank登录号m87661)的5291~537686bp；

b)GII诺如病毒病毒(GenBank登录号x86557)的5012~510089bp。

6检测步骤

采样

水样采集按照GB/T5750.2执行，采样量1L。

样本的运输与保存

0℃~4℃条件下储存和运输，于2h内运送到实验室。24h内完成混匀、病毒富集处理、核酸提取

及实时荧光反转录聚合酶链式反应（Real-timeRT-PCR）检测。

病毒富集

用微生物快速富集系统，富集过程始终保持富集管尖端插入液面以下，待生活饮用水全部富集后洗

脱，洗脱液收集于1.5mL无RNase离心管中，体