组织培养与植物转基因.pptVIP

01原理：利用显微注射仪将外源DNA直接注入受体的细胞质或细胞核中。02重要问题：必须把受体细胞进行固定。03动物细胞具有独特的贴壁生长待性，因此不存在固定细胞的问题。04植物细胞的显微注射必须建立固定细胞技术。目前有三种方法：①琼脂糖（低熔点）包埋法；②多聚-L-赖氨酸粘连法；②吸管（毛细管）支持法。4.6显微注射法原理：脂质体是由人工构建的磷脂双分子层组成的膜状结构，把用来转染的DNA分子包在其中，通过脂质体与细胞接触，将外源DNA导人受体细胞。包装成脂质体的DNA的转染串比裸露的DNA的转染率高出100倍。如先用PEG处理培养的受体细胞，使其易吸收培养基中的脂质体，可提高转染率10—20倍。在正常情况下，每个细胞平均可吸收1000个左右的脂质体。这是哺乳动物转基因研究中常用的方法之一。4.7脂质体介导法原理：利用直径很小（纳米级）、能量很高的激光微束可引起细胞膜可逆性穿孔的原理，在荧光显微镜下用激光处理细胞，处于细胞周围的重组DNA随之进入细胞。此方法最适用于活细胞中线粒体和叶绿体等细胞器的基因转移。4.8激光微束穿孔法5转基因植株的再生及其检测方法植株再生是基因转移的关键步骤，直接决定能否获得转基因植株。两种形式：一种是愈伤组织再生另一种是直接再生，从外植体直接诱导出芽而不经过愈伤组织的分化。转墓因植株再生的方式与一般植株再生的方式相同，主要区别是转基因植株的再生受外源基因、载体系统、抗生素、转化过程的影响。5.1转基因植株再生常采用报告基因作为标记，以便快速检测。主要采用分子生物学方法检测，包括：聚合酶链式反应(PCR)、SouthernBlot、NorthernBlot和WesternBlot等方法。进行分子生物学检测以后还要进行生物学鉴定，以确定基因是否可以正常地表达性状，并稳定地遗传给后代。如果一些有价值的目的基因被转入，还必须鉴定基因的功能及其表型。32145.2转基因植株的检测如转化抗病毒基因：要对转基因植物进行病毒接种，以鉴定抗病毒能力。01若转化的基因为抗除草剂基因：还要对植物喷洒除草剂进行检测。02若转基因植物是食用粮食作物或油料：还要通过转基因植物的安全性检测，以免对人类和环境造成危害。03如果转化的是花色素合成酶基因：则凭肉眼就可直观鉴定花色变化。04*植物组织培养第九章植物遗传转化植物基因工程是指把不同生物有机体的DNA（或基因）分离提取出来，在体外进行酶切和连接，构成重组DNA（RecombinantDNA）分子，然后转化到受体细胞（大肠杆菌）使外源基因在受体细胞中复制增殖，然后借助生物的或理化的方法将外源基因导入到植物细胞，进行转译或表达。01也称为植物遗传转化、植物转基因等。021植物基因工程的概念植物基因工程是80年代开始兴起和发展起来的一门新技术，它是在分子遗传学的理论基础上，综合采用了分子生物学、微生物学和植物组织培养的现代方法和技术建立起来的。转移的目的基因可从动物、人、植物或微生物中获取。植物基因工程首先是随原核生物的基因工程的发展而得以发展。大肠杆菌，酵母，动植物细胞。植物基因工程发展迅速。自从1983年首例转基因植物（烟草）诞生以来，现在已有100多种植物通过基因工程技术获得了转基因植株，包括番茄、辣椒、茄子、马铃薯、胡萝卜、芹菜、莴苣、甜瓜、黄瓜、白菜、甘蓝、花椰菜、芥菜、石刁柏、洋葱、柑橘、柿、杨树、桉树等。*2植物基因工程的载体Ti—载体其它载体RNAi根癌农杆菌（Agrobacteriumtumefaciens）的Ti质粒（Tumor-inducingplasmid）的改建与利用，从而开创了植物基因工程的新纪元。根癌农杆菌DNA植物基因工程中，我们把接受外源(目的)基因的生命体系称为“受体”。受体包括：叶圆片(盘)、胚性愈伤、胚状体、愈伤组织、悬浮细胞、原生质体等不同的形态。其基本形态还是细胞。叶圆片与农杆菌共培养是最简单的转化方法；愈伤组织的转化效率高、生长速度快，是快速检测外源基因表达的最好受体；原生质体则是单克隆转化的最佳材料。3植物基因转化的受体转化植株（未）受精卵细胞花粉胚胚轴子叶叶片茎段萌发种子子房原生质体悬浮培养细胞花器官根创伤植株块茎茎尖植物基因转化的外植体被转化的受体细胞是单个独立的细胞，为选择遗传均一性的转基因植株提供了可能性。01以悬浮细胞作受体的转化方法包括：农杆菌介导法、基因枪法、PEG介导法、电激法和显微注射法等。023.1悬浮细胞与悬浮细胞一样，被转化的受体细胞是单个独立的细胞，为选择遗传均一性的转基因植株提供了可