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技能训练5
细菌标本片的制备及染色方法能利用不同的材料进行细菌标本片的制备掌握常规的染色方法，并认识细菌的不同染色特性实训目标酒精灯、接种环、载玻片、吸水纸、生理盐水、美蓝染色液、革兰氏染色液、瑞氏染色液、染色缸、染色架、洗瓶、显微镜、香柏油、乙醇乙醚、擦镜纸、细菌培养物（大肠杆菌、葡萄球菌等）、细菌病料、无菌镊子和剪刀、特种铅笔等仪器材料12细菌标本片的制作01常用的细菌染色方法02常用染色液的配制03方法步骤涂片标本的制作血液推片和组织抹片的制作涂片干燥涂片固定涂片血液推片的制作组织抹片的制作（一）细菌标本片的制作1．涂片标本的制作涂片取清洁载玻片一块，用吸管吸取生理盐水1滴置于玻片中央，再将接种环在火焰上灭菌，待冷后从固体培养基上挑取少许菌落，置于玻片上的生理盐水中混均匀，并在玻片上涂成直径约为1cm的涂面，要求薄而均匀。干燥涂片在室温下自然干燥，必要时将涂面向上，置火焰上来回微烤使其干燥。固定涂片干燥后，将涂面向上，在火焰上快速来回通过2～3次，其温度以手背接触玻片底面感觉微烫手为宜。2．血液推片和组织抹片的制作血液推片的制作取一张边缘整齐的载玻片，用其一端蘸取少许血液，在另一张干净无油脂的载玻片上，以45°角度均匀地推成一薄血涂片，以红细胞不重叠为宜。组织抹片的制作待检尸体经无菌手术切开胸腹腔后，用经火焰灭菌的镊子夹起组织，用灭菌剪刀剪下小块组织，将组织切面在载玻片上等距离轻压几下，使其留有组织切面的压迹。1美蓝染色法2革兰氏染色法3瑞氏染色法（二）常用的细菌染色方法1．美蓝染色法在已固定好的抹片上，滴加适量美蓝染色液覆盖涂面，染色2～3min，水洗，吸水纸轻压吸干或晾干和镜检，结果菌体呈蓝色。在固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫染色液，作用1～3min，水洗。加革兰氏碘液，作用1～2min，水洗。加95％酒精脱色约30s至1min，水洗。加稀释石炭酸复红，复染30s左右，水洗，吸干后镜检。结果：革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。2．革兰氏染色法
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