新型水稻纹枯病生防菌剂的筛选和抑菌机制研究.pdf

摘要

新型水稻纹枯病生防菌剂的筛选和抑菌机制研究

摘要

水稻纹枯病是由立枯丝核菌（Rhizoctoniasolani）侵染引起的一种真菌病害，

对水稻的产量有很大的影响。立枯丝核菌在水稻整个发育期都能够侵染，有很强的

抗逆性，其产生的菌核能在土壤或植物枯死根部存活数年。目前主要使用的防治方

法有农艺措施、抗性品种选育、化学防治和生物防治。农艺措施对植物病害防治效

果有限，抗性品种选育耗时太长，且不确定性太强。化学防治是目前使用最多的防

治手段，但由于化学杀菌剂易导致土壤农药残留，且长期使用易引起病菌产生抗药

性。微生物在自然界中广泛分布，其中一些微生物能够抑制病原菌的生长与发育，

对环境友好不会产生污染，发展前景光明。目前已有很多防控水稻纹枯病的生防菌

能减少农药的施用降低化学杀菌剂对环境带来的污染，对水稻纹枯病绿色防控以及

我国粮食产量与品质提升有重要意义。

本研究我们从安徽省芜湖市三山区分离得到了一株能引起水稻纹枯病的病原菌，

经过测序分析其为一株新型立枯丝核菌（结果尚未发表），其生长速度快，侵染能

力强，目前没有生防菌剂可以有效防控该立枯丝核菌引起的水稻纹枯病。因此，本

研究以该病原菌为对象，分离筛选能够有效防治该菌引起的水稻纹枯病的生防菌，

并对其进行鉴定，明确生防菌的抑菌机制，并最终获得防效较好的生防菌剂。其具

体研究如下：

1.生防菌的分离筛选和鉴定以及防效鉴定。相较于土壤微生物，内生微生物能

够长期定植于植物中，且生防菌也可以为植物的生长提供营养来源。本研究主要筛

选植物内生微生物，一共分离得到86株植物内生微生物，通过平板对峙实验，筛

选获得6株对立枯丝核菌有抑制作用的生防菌。进一步研究发现防效较好的生防菌

能对立枯丝核菌生长造成影响并使该立枯丝核菌菌丝细胞核不正常凋亡抑制其菌丝

生长从而起到防治效果。对这些生防菌16SrRNA基因和gyrB基因测序分析，基于

这两个序列，分别建立系统发育树来确定这6株菌分别为A4为绿针假单胞菌

（Pseudomonaschlororaphis），An-2、Y-14和LY-3为高地芽孢杆菌

BacillusaltitudinisAn-1BacillusaeriusAn-4

（），空气芽孢杆菌（），为短小芽孢

杆菌（Bacilluspumilus）。

2.A4A4

绿针假单胞菌代谢产物的初步研究。绿针假单胞菌能够高效抑制立枯

丝核菌的生长，因此，本研究以A4为主，通过对其发酵产物逐步分离得到有效成

分，发现乙酸乙酯组分中在250nm波长处有三个单独的高峰。通过查阅文献，购

买标样进行HPLC分析，再将三个峰分别分馏回收，进行MS质谱分析，最终确定

-1-PCA2-2-OHPHZ2--1-

三个物质分别为吩嗪羧酸（）、羟基吩嗪（）、羟基吩嗪羧

酸（2-OHPCA)。通过胁迫实验确定三个物质的防效，并计算三个物质的半数效应

浓度（EC），PCA为EC13.70µg/mL；OHPHZ为EC21.00µg/mL；OHPCA

505050

EC15.66µg/mLPCA2-

为50。通过向水稻叶片上喷淋含有三种吩嗪类化合物、

OHPHZ、2-OHPCA的A4无细胞发酵液乙酸乙酯提取物，并每7d收集一次叶片提

取内含物进行HPLC，与原始样品比对证明了PCA、2-OHPHZ、2-OHPCA在水稻

叶片上存留时间较短容易降解可能是绿针假单胞菌A4防治效果较差的原因。除