蜡样芽胞杆菌检测.pptVIP

根状生长30℃，24h培养，室温放置3天后根状生长观察。在定量检测方面，美国FDA、ISO、以及SN0176-92标准除采用平板计数外，还采用了MPN法。新标准增加MPN法，以弥补样品中蜡样芽胞杆菌带菌量少于103cfu/mL时用平板计数法计数不准的问题；该方法操作与现行大肠菌群的操作类似，容易推广使用。扩大检测范围便于与国际接轨随着经济全球化的发展，食品贸易不断扩大，食品安全问题越来越到受各国政府的重视，为了保护我国消费者健康，避免贸易摩擦，急需对原标准进行修订，使其与国际接轨。提高方法的适用性和可操作性新标准将考虑我国的实际情况，使蜡样芽胞杆菌检测方法具有更好的适用性和可操作性。并保持与原标准的连续性。新标准与GB/T4789.14-2003相比主要修改如下:1--修改了标准的中英文名称；2--增加了第二法蜡样芽胞杆菌MPN计数法；3--将选择性分离培养基（MYP）培养条件由37℃培12h-20h改为30℃±1℃培养24h-48h；4--增加了根状生长试验和溶菌酶试验。5--增加了附录A、附录B。食品安全国家标准1食品微生物学检验2蜡样芽胞杆菌检验3（修订版）4本标准规定了食品中蜡样芽胞杆菌的检验方法。01本标准第一法适用于蜡样芽胞杆菌含量较高的食品中蜡样芽胞杆菌的计数；第二法适用于蜡样芽胞杆菌含量较低的食品样品中蜡样芽胞杆菌的计数。021范围2设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其它设备和材料如下：冰箱：2℃-5℃;恒温培养箱：30℃±1℃、36℃±1℃;均质器;电子天平：感量0.1g;无菌锥形瓶：100mL、500mL;无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头;无菌平皿：直径90mm;无菌试管：18mm×180mm;显微镜：10倍-100倍（油镜）;L涂布棒。01磷酸盐缓冲液（PBS）02甘露醇卵黄多黏菌素（MYP）琼脂03胰酪胨大豆多黏菌素肉汤04营养琼脂055过氧化氢溶液066动力培养基077硝酸盐肉汤088酪蛋白琼脂3培养基和试剂01硫酸锰营养琼脂培养基02糖发酵管03V-P培养基04胰酪胨大豆羊血（TSSB）琼脂05溶菌酶营养肉汤06西蒙氏柠檬酸盐培养基07明胶培养基3培养基和试剂蜡样芽胞杆菌平板计数法（第一法）4检验程序5操作步骤冷冻样品应在45℃以下不超过15min或在2℃～8℃不超过18h解冻。若不能及时检验，应放于-15℃左右保存；01非冷冻而易腐的样品应尽可能及时检验。若不能及时检验，应置于2℃～8℃冰箱保存，在24h内检验。025.1样品处理5.2样品制备以无菌操作取样品25g（mL），加入PBS225mL，用旋转刀片式均质器以8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或拍击式均质器拍击2min。如无均质器，则将样品放入无菌乳钵中磨碎，然后称取25g（mL）置合适的容器中，加225mLPBS，充分振荡混匀。制成1:10的样品匀液。01吸取上述1:10的样品匀液1mL加到装有9mLPBS或生理盐水的稀释管中，充分混匀制成1:100的样品匀液。02据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管或吸头。5.3样品的稀释0102根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），以0.3mL、0.3mL、0.4mL接种量分别入三块MYP琼脂平板，然后用无菌L棒涂布整个平板，注意不要触及平板边缘。使用前，如MYP琼脂平板表面有水珠，可放在25℃～50℃的培养箱里干燥，直到平板表面的水珠消失。5.4样品接种5.5.1分离01如果菌落不典型，可继续培养24h±2h再观察。03在通常情况下，涂布后，将平板静置10min。如样液不易吸收，可将平板放在培养箱30℃±1℃培养1h，等样品匀液吸收后翻转平皿，倒置于培养箱，30℃±1℃培养24h±2h。025.5分离、培养分离在MYP琼脂平板上，典型菌落为微粉红色(表示不发酵甘露醇)，周围有白色至淡粉红色沉淀环（表示产卵磷脂酶）。01从每个平板中至少挑取3个典型菌落（小于3个全选），分别划线接种于营养琼脂平板做纯培养，30℃±1℃培养24h±2h，进行确证实验。02在营养琼脂平板上，典型菌落