酶非水相催化.pptVIP

布洛芬酶法拆分示意非甾体抗炎剂类手性药物广泛用于人联结组织疾病如关节炎,活性成分是2-芳基丙酸的衍生物(CH3CHArCOOH),如萘普生,布洛芬等。台湾的Tsai证实在80%异辛烷与20%甲苯中酶反应获得较高ee值光学活性物。非甾体抗炎剂类手性药物拆分四、键选择性（chemoselectivity)黑曲霉脂肪酶毛霉脂肪酶羟基酰化氨基酰化占优6-氨基-1-已醇即同一个底物分子中有2种以上化学键可与酶反应，酶对其一优先反应。热稳定性五、热稳定性有机溶剂中酶的热稳定性和储存稳定性都比水溶液中高。例如：猪胰脂肪酶（PPL）在苯中催化酯交换反应时，（1）酶活性随温度升高（20～70℃）而增加，（2）在70℃连续反应7次（每次96h）后酶活力仍保持60％，（3）在100℃时的半衰期可达数十小时，而在水中100℃几乎马上失活。PPL的稳定性取决于有机溶剂中水的浓度，1％的水，会使PPL的稳定性降低到和水溶液中相同的水平。在有机介质中酶所处的pH环境与酶在冻干或吸附到载体上之前所使用的缓冲液pH值相同，称为pH印记或pH记忆（pH-imprinting）;现象：脂肪酶催化三丁酸甘油与正庚醇的转酯反应，酶的反应速度与其冷冻干燥前水溶液的的PH密切相关，反应的最适PH接近于水溶液中的最适PH六、pH值特性01原因：当酶分子从水溶液转移到有机介质时，原有的解离状态不变，被保持在有机介质中；有机介质中酶催化反应的最适ph通常与在水溶液的pH接近；但有些有机溶剂中酶的最PH与水溶液中相差较大，还与缓冲液种类和离子强度有关;0203第四节

有机介质中酶催化反应的

条件及其控制酶在有机介质中的催化反应受各种因素影响，主要有酶、底物、有机溶剂种类、水含量、温度、pH值和离子强度等。一、有机介质中酶催化反应的类型logo1、合成反应2、转移反应3、醇解反应4、氨解反应5、异构反应6、氧化还原反应7、裂合反应1、合成反应有机介质中水含量极微，可催化水解反应的逆反应；脂肪酶或酯酶催化有机酸和醇进行酯的合成反应：意义:酶催化酯合成可合成手性化合物,且酶的立体选择性主要是选择立体异构的醇。蛋白酶可在有机介质中催化氨基酸进行合成反应，生成多肽2、转移反应如脂肪酸催化酯与有机酸反应生成另一种酯与有机酸,即转酯反应：3、醇解反应假单胞脂肪酶催化酸酐醇生成二酸单酯化合物即酸酐水解反应,例:4、氨解反应01如脂肪酶催化酯类进行不对称氨解反应：03酰胺02苯丙氨酸甲酯04叔丁醇异构反应如消旋酶催化一种异构体为另一种异构体例单加氧双加氧催化醛类或酮类还原成醇类6、氧化还原反应（1）单加氧（2）双加氧（3）催化醛类或酮类还原成醇类7、裂合反应如醇腈酶催化醛与氢氰酸的反应不同酶具不同结构和特性，同一种酶由于来源、处理法不同特性亦有差别；010203酶反应速度与酶浓度成正比；另注意酶的稳定性、底物专一性,对映体选择性、区域选择性、键选择性等二、酶的选择01020304有机剂与水中酶的底物专一性不同；底物浓度对酶催化速度有明显的影响；有机介质中要考虑底物在有机溶剂和必需水层中的分配情况；高浓度底物会对反应产生不利影响。三、底物的选择和浓度控制有机剂的极性要选择恰当：极性过强,夺取较多酶表面水分子,使疏水性底物溶解度降低;极性过弱,底物难以进入必需水层;故取中间:2≤lgP≤5四、有机溶剂的选择2、与水混溶的有机介质其含量对酶催化有影响。与水混溶的二氧六环介质,辣根过氧化酶(HRP)催化对苯基苯酚的聚合反应,随着二氧六环的含量增加,酶催化得到的聚合物的分子量也增加,80%时最大。二氧六环含量/%聚合物相对分子质量五、含水量的控制当其它因素不变时，系统含水量对酶活性有影响，只有在最适含水量时酶才有最高活力；最适水含量通常随溶剂极性增大（lgP减小）而增大；1水含量反应速度21341-已烷2-四氯甲烷3-甲苯4-苯01微水有机介质中含水量低，酶的热稳定性增强，其最适温度高于水溶液中催化的最适温度；温度低，酶的立体选择性高。Lam和Keinan的实验结果支持此结论；02六、温度的控制酶在冷冻干燥过程中，pH状态有变化；C加有机相缓冲液可对有机介质中酶反应的pH调节。F可通过调节缓冲液pH的方法调节有机介质中酶催化的pH值；B希令（hilling)发现缓冲液对冷冻干燥过程中pH值和酶活力有影响，故加入一定量的蔗糖、甘露醇等冷冻干燥保护剂；D在酶液冻干之前或催化过程采取保护措施；E酶在有机介质中的最适P